低成癮性鎮(zhèn)痛藥物高通量篩選平臺的建立及其初步評價.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、從胎盤組織提取總RNA,通過RT-PCR得到了κ-型阿片受體的cDNA,經(jīng)過序列分析證實,所獲得的cDNA與文獻報道的序列完全一致.將κ-型阿片受體的cDNA克隆到pcDNA3.1中,酶切正確的重組質(zhì)粒命名為pOPR4,將pOPR4與pcDNA3.1采用脂質(zhì)體法分別轉(zhuǎn)染CHO細胞,篩選的單克隆細胞株分別命名為CHO-OPR和CHO-P,通過PCR鑒定后獲得了8個陽性細胞株CHO-OPR1~8和兩個CHO-P.將8個重組細胞株同時用U69

2、593處理,觀察重組細胞株表達的κ-型阿片受體介導胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導能力的有無及其強弱,得到了兩個細胞株CHO-OPR5和CHO-OPR8的信號介導能力最強.將CHO-OPR5和CHO-OPR8進行受體與特異性配體結(jié)合能力的分析,經(jīng)過受體與特異性配體U69593的結(jié)合實驗表明:κ-型阿片受體在CHO細胞的表面得到了不同程度的表達,表達的κ-型阿片受體能與配體U69593特異性結(jié)合,其中CHO-OPR5表達的κ-型阿片受體對標記配體的最大結(jié)合

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