鞘內(nèi)羅哌卡因伍用右美托咪定通過抑制脊髓神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞活化協(xié)同調(diào)控慢性炎性痛大鼠的痛覺過敏.pdf

1、背景：慢性疼痛是長期困擾人類的頑疾，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。神經(jīng)阻滯技術(shù)用于治療某些頑固性疼痛，如幻肢痛、帶狀皰疹后神經(jīng)痛及復(fù)雜區(qū)域疼痛綜合征等效果顯著。隨著局麻藥更新?lián)Q代，左旋布比卡因、羅哌卡因（rop ivacaine,Ropi）等低毒高效的局麻藥相繼應(yīng)用于臨床，但高濃度局麻藥在產(chǎn)生強(qiáng)效鎮(zhèn)痛的同時(shí)所造成的運(yùn)動阻滯也給患者日常生活造成不便。雖然低濃度羅哌卡因具有“感覺—運(yùn)動分離阻滯”的特性，但低濃度較大劑量的單獨(dú)用藥，隨之增加神經(jīng)并發(fā)

2、癥也倍受關(guān)注。因此，現(xiàn)代疼痛治療多采用聯(lián)合用藥的策略，以兩種或兩種以上藥物相互作用（協(xié)同或疊加）為基礎(chǔ)，以減少用藥劑量，達(dá)到更好地鎮(zhèn)痛效應(yīng)，并減少相關(guān)并發(fā)癥。前期研究表明，右美托咪定（dexmedetomidine,Dex）其可有效延長術(shù)后鞘內(nèi)鎮(zhèn)痛的時(shí)間，且并未觀察到神經(jīng)并發(fā)癥和其他不良反應(yīng)的發(fā)生，提示鞘內(nèi)應(yīng)用右美托咪定可能與局麻藥產(chǎn)生一定協(xié)同或疊加效應(yīng)，但作用機(jī)理近乎空白，亟需開展研究。我們的前期研究表明，神經(jīng)元—星形膠質(zhì)細(xì)胞相互作用

3、是參與慢性炎性痛維持和發(fā)展的重要環(huán)節(jié)，故本研究擬在大鼠神經(jīng)慢性炎性痛模型上，綜合應(yīng)用超微結(jié)構(gòu)形態(tài)學(xué)、計(jì)算機(jī)三維重塑、分子生物學(xué)、神經(jīng)藥理學(xué)、行為學(xué)等實(shí)驗(yàn)手段以及等輻射分析（isobolographic analysis）等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，研究鞘內(nèi)羅哌卡因伍用右美托咪定的相互作用，及其對神經(jīng)元-星形膠質(zhì)細(xì)胞的調(diào)控在慢性炎性痛中的作用。
　　目的：觀察鞘內(nèi)Ropi伍用Dex對CFA誘導(dǎo)的慢性炎性痛大鼠輻射熱痛敏的相互作用，并探討其機(jī)制。<

4、br>　　方法：（1）大鼠足掌中部皮下注射完全福氏佐劑（complete Freund adjuvant,CFA）建立慢性炎性痛模型；
　?。?）運(yùn)用Hargreaves熱輻射法檢測 CFA足底注射后熱縮足潛伏期（paw withdrawal latencies,PWLs）的動態(tài)變化；
　?。?）免疫熒光組織化學(xué)染色檢測脊髓背角神經(jīng)元Fos及計(jì)算機(jī)三維重塑技術(shù)檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary

5、 acidic protein,GFAP）表達(dá)的動態(tài)變化；
　?。?）Western Blot檢測足底注射CFA后星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP的表達(dá)變化；
　?。?）大鼠鞘內(nèi)置管分別給予不同劑量Ropi或Dex；
　　（6）運(yùn)用Hargreaves熱輻射法檢測給予不同劑量Ropi或Dex后大鼠PWLs的動態(tài)變化；
　?。?）分別建立鞘內(nèi)Ropi或Dex的量效曲線，并計(jì)算50％抗熱痛有效劑量（50% effective d

6、ose,ED50）；
　?。?）根據(jù)RopiED50和DexED50計(jì)算Ropi&DexED50add，并確定鞘內(nèi)聯(lián)合給予Ropi&Dex的藥物劑量（藥物聯(lián)用后理論抑制熱痛10%、20%、40%、80%的劑量，即Dex&Ropi:ED50add*1/10,ED50add*2/10,ED50add*4/10和ED50add*8/10）；
　?。?）大鼠鞘內(nèi)置管給予不同劑量Ropi&Dex；
　　（10）運(yùn)用 Hargre

7、aves熱輻射法檢測給予不同劑量Ropi&Dex后大鼠PWLs的動態(tài)變化；
　　（11）建立鞘內(nèi)Ropi&Dex的量效曲線，等輻射分析計(jì)算實(shí)際聯(lián)合用藥ED50，即ED50comb；
　?。?2）大鼠鞘內(nèi)置管分別連續(xù)給予RopiED50、DexED50或Ropi&DexED50comb；
　?。?3）免疫熒光組織化學(xué)染色檢測給藥后脊髓背角神經(jīng)元Fos及計(jì)算機(jī)三維重塑技術(shù)檢測給藥后星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP表達(dá)的動態(tài)變化；

8、>　?。?4）Western Blot檢測給藥后星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP的表達(dá)變化；
　?。?5）反復(fù)給藥，觀察鞘內(nèi)給予最大劑量Ropi&Dex的鎮(zhèn)痛效應(yīng)；
　?。?6）曠場實(shí)驗(yàn)（open field,OF）檢測各最高劑量組大鼠自發(fā)活動和情緒變化；
　　（17）轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)檢測各最高劑量組大鼠運(yùn)動協(xié)調(diào)能力；
　?。?8）蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin,HE）染色檢測各最高劑量組大鼠脊髓組織病理學(xué)變化。<

9、br>　　結(jié)果：（1）大鼠足掌中部皮下注射CFA可使注射側(cè)足產(chǎn)生顯著的持續(xù)性疼痛，表現(xiàn)為輻射熱痛閾的下降；
　?。?）脊髓背角神經(jīng)元在CFA注射后2 h~1 d即達(dá)活化高峰，隨后下降，并持續(xù)至CFA注射后7 d，表現(xiàn)為Fos陽性神經(jīng)元數(shù)目的增加；
　?。?）脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞在CFA注射后3 d開始活化，7 d達(dá)活化高峰，表現(xiàn)為GFAP蛋白表達(dá)的增多；
　?。?）鞘內(nèi)單次分別給予Ropi或Dex均具有劑量依賴性的鎮(zhèn)痛

10、效應(yīng)，表現(xiàn)為輻射熱痛閾的上升；
　?。?）鞘內(nèi)RopiED50為13.85μg/200 g，DexED50為1.65μg/200 g；
　?。?）鞘內(nèi)Ropi&DexED50add=0.83 Dex+6.93 Ropi，Ropi&DexED50comb=0.63 Dex+5.26 Ropi。等輻射分析結(jié)果提示，鞘內(nèi)聯(lián)合給予Ropi&Dex具有協(xié)同效應(yīng)，表現(xiàn)為鎮(zhèn)痛程度增強(qiáng)、鎮(zhèn)痛時(shí)間延長，并呈劑量依賴性變化；
　?。?）鞘

11、內(nèi)分別連續(xù)注射Ropi或Dex均可抑制CFA誘導(dǎo)的慢性炎性痛狀態(tài)下脊髓背角神經(jīng)元的活化，尤其在2 h~1 d，聯(lián)合給藥具有協(xié)同抑制效應(yīng)，表現(xiàn)為Fos陽性神經(jīng)元數(shù)目的減少；
　　（8）鞘內(nèi)分別連續(xù)注射Ropi或Dex均可抑制CFA誘導(dǎo)的慢性炎性痛狀態(tài)下脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化，尤其在5~7 d，聯(lián)合給藥具有協(xié)同抑制效應(yīng)，表現(xiàn)為GFAP蛋白表達(dá)的減少；
　?。?）反復(fù)鞘內(nèi)給予最大劑量Ropi&Dex不產(chǎn)生痛覺敏化或藥物耐受；<

12、br>　?。?0）OF實(shí)驗(yàn)表明，鞘內(nèi)置管和鞘內(nèi)各最高劑量給藥對大鼠自發(fā)活動和情緒變化均無顯著影響，表現(xiàn)為與對照組相比，平均速度和中央活動時(shí)間百分比無顯著降低；
　?。?1）轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)表明，鞘內(nèi)置管和鞘內(nèi)各最高劑量給藥對大鼠運(yùn)動協(xié)調(diào)能力均無顯著影響，表現(xiàn)為與對照組相比，置管/給藥前后棒上停留時(shí)間百分比無顯著降低；
　?。?2）鞘內(nèi)注射Ropi在24 h可引起神經(jīng)元周圍明顯的炎癥細(xì)胞浸潤，伍用Dex可減輕24 h內(nèi)的炎癥細(xì)胞浸潤，

13、在給藥7 d后神經(jīng)元周圍炎癥細(xì)胞浸潤無明顯差異。
　　結(jié)論：（1）足掌中部皮下注射CFA可產(chǎn)生顯著的輻射熱痛敏，且同側(cè)脊髓背角Fos和GFAP呈時(shí)間依賴性變化，提示神經(jīng)元—星形膠質(zhì)細(xì)胞的相互作用與CFA誘導(dǎo)的慢性炎性痛密切相關(guān)；
　?。?）鞘內(nèi)分別給予Ropi和Dex均可阻斷脊髓神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化而緩解疼痛，且Ropi&Dex呈對輻射熱痛敏的緩解和脊髓神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的抑制呈協(xié)同作用，提示抑制脊髓神經(jīng)元—星形