不同雞MHC單倍型的判定及同種異型抗血清的制備.pdf

1、我國是養(yǎng)禽大國且養(yǎng)禽產(chǎn)業(yè)發(fā)展非常迅速，而疾病是限制養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的一個(gè)重要因素。長時(shí)間以來，養(yǎng)禽業(yè)控制疾病主要依賴疫苗免疫，由于MDV等病毒的普遍存在及病毒毒力的不斷增強(qiáng)等許多原因，使得免疫雞群甚至是免疫過疫苗的雞群仍時(shí)有感染。因此，研究者開始轉(zhuǎn)向雞的抗病育種研究，期望能在遺傳素質(zhì)上提高雞只的抗病性。許多研究已經(jīng)表明，MHC基因的多態(tài)性在家禽中與多種傳染病的抗性存在高度相關(guān)性，是家禽抗病育種研究中的優(yōu)選標(biāo)記基因。在雞上，已發(fā)現(xiàn)某些MHC單倍

2、型與抗病性、免疫應(yīng)答及經(jīng)濟(jì)性狀間具有相關(guān)性，但對(duì)其研究還遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于人類，分析出不同雞種的血型單倍型關(guān)系并對(duì)那些具有抗性的雞種進(jìn)行選育，具有重要的經(jīng)濟(jì)意義。本研究以26個(gè)中國地方雞種和外來雞種為研究對(duì)象，根據(jù)MHC基因上LEI0258微衛(wèi)星座位的序列信息，對(duì)這些雞種進(jìn)行MHC單倍型的判定，并在新?lián)P州雞群體內(nèi)制備了B21和B18兩種同種免疫抗血清，并在不同雞群中用血清學(xué)方法對(duì)抗血清進(jìn)行了驗(yàn)證。
　　首先，為了確定不同雞種的MHC單倍型

3、，我們選取26個(gè)雞種，每個(gè)雞種按照10個(gè)個(gè)體混成一個(gè)DNA池的標(biāo)準(zhǔn)送入華大基因公司(BGI)對(duì)MHC基因進(jìn)行目標(biāo)捕獲測序，找出不同雞種MHC基因序列上的差異，發(fā)現(xiàn)在BLB2、BMA2、B-NKNK、LOC100858749、TAP2基因上外來雞種與地方雞種存在較大差異，這些基因可以作為以后抗病研究的候選基因。根據(jù)MHC基因上LEI0258微衛(wèi)星重復(fù)序列片段數(shù)目的不同以及圍繞重復(fù)序列的側(cè)翼序列的多態(tài)性，對(duì)不同雞種進(jìn)行MHC單倍型的判定，并

4、根據(jù)文獻(xiàn)資料，對(duì)不同血型單倍型與疾病抗性的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果表明:LEI0258微衛(wèi)星座位序列多態(tài)性豐富，不同雞種在LEI0258微衛(wèi)星座位上也存在著位點(diǎn)差異性，26個(gè)雞種分為以下不同單倍型:烏骨雞為B18單倍型;來航雞為B5單倍型;溧陽雞為B10/B24/B26/B76單倍型;廣西黃雞與白耳雞為B72/B78單倍型;羅斯雞、固始雞、雪山草雞、蕭山雞、隱性白羽雞、鹿苑雞、太湖雞和綠殼蛋雞都為B21.1/BQ/BW1單倍型;安卡雞、大

5、骨雞、文昌雞及青腳麻雞為BC單倍型;斗雞、紅色原雞、仙居雞、狼山雞、如草雞、北京油雞和AA雞為BC/B21.1/BQ/BW1單倍型;藏雞與茶花雞出現(xiàn)了新的單倍型。由于MHC血型單倍型與疾病抗性存在密切關(guān)系，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道及測得不同雞種的MHC單倍型，結(jié)果顯示:烏骨雞為B18單倍型對(duì)SE顯示為易感性;來航雞為B5單倍型對(duì)MD、RSV、ALV以及IBD顯示出易感性;羅斯雞、固始雞、雪山草雞、蕭山雞、隱性白羽雞、鹿苑雞、太湖雞、綠殼蛋、斗雞、紅

6、色原雞、仙居雞、狼山雞、如草雞、北京油雞和AA雞都含B21單倍型，對(duì)MD、AL以及IBD顯示出較強(qiáng)的抗性，這些雞種對(duì)不同疾病顯示出不同的抗性。這些結(jié)果表明我國地方雞種中MHC單倍型種類比較豐富，遺傳多樣性較高，這可能是地方雞種比外來雞種及現(xiàn)代商業(yè)品種抗性強(qiáng)的主要原因之一。
　　由于血型是可以遺傳的，通過紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)利用特異性抗血清可以快速鑒定出不同雞種的血型，這種方法簡便快捷，有廣泛的使用價(jià)值。我們選定新?lián)P州雞對(duì)LEI0258微

7、衛(wèi)星片段進(jìn)行擴(kuò)增并進(jìn)行重測序分析，找出含有B21和B18單倍型的雞只，并以它們的外周血紅細(xì)胞作為免疫原，對(duì)其它單倍型雞進(jìn)行免疫，制備了同種異型抗血清，建立了微量血凝試驗(yàn)，對(duì)抗血清效價(jià)進(jìn)行了測定并在新?lián)P州雞和羅斯雞群體內(nèi)用血清學(xué)方法進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果表明:新?lián)P州雞群體內(nèi)存在不同單倍型，同單倍型不同個(gè)體雞的效價(jià)大致相同，B21抗血清血和B18抗血清凝效價(jià)均為1∶4。利用血清學(xué)鑒定手段在新?lián)P州雞和羅斯雞群體內(nèi)檢測兩種抗血清效果，結(jié)果顯示新?lián)P州雞