版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、離子液體作為一種綠色溶劑,具有許多獨(dú)特的物理化學(xué)性質(zhì),已獲得廣泛關(guān)注。離子液體雙水相萃取技術(shù)是提取和純化生物活性物質(zhì)的一種新型分離方法。功能化離子液體雙水相體系能有效地將離子液體與雙水相萃取技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)相結(jié)合,具有無(wú)毒、安全、簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn),已被廣泛應(yīng)用于生物轉(zhuǎn)化,分離純化蛋白質(zhì)、核酸和病毒等多個(gè)研究領(lǐng)域。功能化離子液體磁性固相萃取技術(shù)是在磁性固相萃取劑的表面修飾上功能化離子液體,從而形成具有某種特定功能或者應(yīng)用的一種新型固相萃取技術(shù)。
2、
胍鹽離子液體是離子液體家族中的新成員,它合成簡(jiǎn)單、熱穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性高、生物活性強(qiáng)、具有很好的可設(shè)計(jì)性。
本研究前3個(gè)工作設(shè)計(jì)合成了胍鹽離子液體,結(jié)合微波萃取技術(shù)用于中藥前胡有效成分的分離分析;將胍鹽離子液體進(jìn)行功能化,結(jié)合雙水相萃取技術(shù)和磁性固相萃取技術(shù),建立了萃取分離蛋白質(zhì)的方法。
隨后由于赴加州大學(xué)洛杉磯分校進(jìn)行博士聯(lián)合培養(yǎng)(2014年9月-2016年7月),本研究后3個(gè)工作轉(zhuǎn)化為心肌細(xì)胞電生理性
3、質(zhì)的研究和癌細(xì)胞的機(jī)械性質(zhì)研究,從電生理的角度考察了心肌細(xì)胞的成熟過(guò)程,并探究了葡萄糖在心肌細(xì)胞成熟過(guò)程中所扮演的角色,為細(xì)胞電生理活動(dòng)的研究提供了一種有效方法。以膀胱癌細(xì)胞為樣本,提出了一種從單細(xì)胞層面檢測(cè)癌細(xì)胞機(jī)械性質(zhì)的方法。論文主要內(nèi)容如下:
(1)胍鹽離子液體微波輔助萃取中藥前胡中的白花前胡甲素
提出了一種胍鹽離子液體微波輔助萃取法,對(duì)中藥前胡的活性成分——白花前胡甲素進(jìn)行萃取。萃取后,反相高效液相色譜結(jié)合紫
4、外檢測(cè)器用于白花前胡甲素含量的測(cè)定。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和三水平四因素正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了萃取工藝參數(shù),白花前胡甲素萃取量最高值達(dá)到11.92±0.10 mg/g。將所擬萃取方法與胍鹽離子液體熱回流萃取法、胍鹽離子液體冷浸萃取法和胍鹽離子液體超聲輔助萃取法進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)胍鹽離子液體微波輔助萃取法萃取率最高,耗時(shí)最短。白花前胡甲素在0.005-0.200 mg/mL范圍內(nèi)峰面積與濃度線性關(guān)系良好,最低檢出限為2.07μg/mL,樣品的回收率在99.2
5、3-100.07%之間。方法學(xué)考察結(jié)果表明:本研究建立的分析方法精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性均良好,其中精密度實(shí)驗(yàn)與重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)所得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為0.34%和0.52%,穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)溶液的白花前胡甲素RSD為0.67%,萃取溶劑中的白花前胡甲素RSD為1.0%。采用動(dòng)力學(xué)曲線、場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡(SEM)和傅立葉變換紅外光譜技術(shù)(FTIR)對(duì)前胡萃取前后殘?jiān)谋砻嫖⒂^結(jié)構(gòu)和成分進(jìn)行了研究,初步探討了胍鹽離子液體微波輔助萃取法
6、的萃取機(jī)理。最后將所擬方法用于前胡實(shí)際藥材分析,結(jié)果表明:因產(chǎn)地不同,藥材中白花前胡甲素的含量差異顯著。
(2)功能化胍鹽離子液體雙水相萃取蛋白質(zhì)
合成了一系列新型的陽(yáng)離子功能化六烷基胍鹽離子液體和陰離子功能化四烷基胍鹽離子液體,將這些功能化離子液體與磷酸鹽溶液形成雙水相體系用于蛋白質(zhì)的萃取分離分析。采用紫外光譜分析法在278 nm處對(duì)代表性蛋白質(zhì)BSA進(jìn)行定性及定量分析檢測(cè)。研究采用單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了萃取參數(shù),其萃取
7、工藝參數(shù)的最佳組合為:離子液體用量4.0 mmol,鹽溶液濃度0.6 g/mL,溫度25℃,蛋白質(zhì)加入量在12-24 mg區(qū)間內(nèi),得到蛋白質(zhì)的最高萃取率為97.05%。在同等條件下,比較了功能化胍鹽離子液體雙水相體系與普通離子液體雙水相體系的萃取能力,發(fā)現(xiàn)功能化胍鹽離子液體雙水相體系成相能力更強(qiáng),萃取率更高。方法學(xué)考察結(jié)果表明:本研究建立的分析方法精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性均良好,其RSD分別為1.1%、1.6%和1.8%。采用動(dòng)態(tài)光散射法
8、(DLS)、電導(dǎo)率測(cè)定法和透射電鏡技術(shù)(TEM)對(duì)離子液體雙水相體系萃取蛋白質(zhì)的機(jī)理進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)粒子和離子液體粒子在萃取過(guò)程中發(fā)生了簇集。并通過(guò)紫外光譜(UV)、紅外光譜(FTIR)和園二色譜(CD)對(duì)蛋白質(zhì)萃取前后結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行了研究,結(jié)果表明:萃取后,蛋白質(zhì)分子的二級(jí)結(jié)構(gòu)并沒(méi)有被破壞。
(3)功能化胍鹽離子液體修飾的磁性顆粒固相萃取蛋白質(zhì)
制備了磁性殼聚糖-氧化石墨烯磁性顆粒(MCGO),將它分別修飾上不
9、同的新型功能化胍鹽離子液體(FGILs),以此作為固相萃取劑(MCGO-FGILs),結(jié)合磁性固相萃取技術(shù),用于蛋白質(zhì)的萃取分離分析。通過(guò)紅外光譜(FTIR)、振動(dòng)樣品磁強(qiáng)計(jì)(VSM)、掃描電子顯微鏡(SEM)、X射線衍射(XRD)對(duì)所合成的磁性固相萃取劑進(jìn)行了表征。采用紫外光譜分析法在278 nm處對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定性及定量分析檢測(cè)。經(jīng)過(guò)一系列單因素實(shí)驗(yàn)獲得最優(yōu)萃取條件為:蛋白質(zhì)濃度2.5mg/mL,MCGO-FGILs加入量12 mg,
10、pH值5.0,溫度30℃,萃取時(shí)間30分鐘。得到的萃取容量分別為:18.9833 mg/g(BSA),20.6725 mg/g(OVA),35.2640 mg/g(Try),38.4006 mg/g(Lys)。將MCGO-FGILs與磁性殼聚糖(MC)、氧化石墨烯(GO)、磁性殼聚糖-氧化石墨烯磁性顆粒(MCGO)進(jìn)行了比較,發(fā)現(xiàn)MCGO-FGILs的萃取量最高,達(dá)到48.8 mg/g。用1.0% NaOH溶液做洗脫液,考察了MCGO-
11、FGILs的洗脫和重復(fù)利用能力,發(fā)現(xiàn)使用三次之后,MCGO-FGILs的萃取能力仍有94.0%。方法學(xué)考察結(jié)果表明儀器精確性、方法重現(xiàn)性和穩(wěn)定性良好,其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為1.3%、1.7%和1.0%。
(4)小鼠胚胎干細(xì)胞分化的心肌細(xì)胞成熟過(guò)程中電生理特性研究
設(shè)計(jì)了一個(gè)由小鼠胚胎干細(xì)胞分化的心肌細(xì)胞二維融合層構(gòu)成的細(xì)胞外場(chǎng)電位檢測(cè)體系,利用微電極陣列系統(tǒng)從電生理角度對(duì)細(xì)胞的成熟情況進(jìn)行了實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。所得信號(hào)
12、類似心電圖,通過(guò)對(duì)細(xì)胞心跳間期、場(chǎng)電位振幅、場(chǎng)電位持續(xù)時(shí)間、傳導(dǎo)速度、去極化過(guò)程進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)在小鼠心肌細(xì)胞的成熟過(guò)程中,細(xì)胞的場(chǎng)電位振幅和傳導(dǎo)速度隨細(xì)胞逐漸成熟得到了增長(zhǎng),而心跳間期和場(chǎng)電位持續(xù)時(shí)間始終保持穩(wěn)定,其中心跳間期始終維持在1.5 s左右,場(chǎng)電位持續(xù)時(shí)間維持在0.2-0.4 s之間。利用Matlab軟件從時(shí)間和空間的角度對(duì)細(xì)胞電信號(hào)進(jìn)行分析,找到了心肌細(xì)胞的起博點(diǎn)位置并得到了電信號(hào)的傳播趨勢(shì),對(duì)細(xì)胞的成熟過(guò)程進(jìn)行了表征,為下
13、一章的工作奠定了基礎(chǔ)。
(5)葡萄糖缺乏對(duì)人體胚胎干細(xì)胞分化的心肌細(xì)胞成熟過(guò)程的影響研究
設(shè)計(jì)了一個(gè)由人體胚胎干細(xì)胞分化的心肌細(xì)胞二維融合層構(gòu)成的細(xì)胞外場(chǎng)電位檢測(cè)體系,利用微電極陣列系統(tǒng)從電生理角度對(duì)細(xì)胞的成熟情況進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)研究了葡萄糖對(duì)心肌細(xì)胞成熟過(guò)程的影響。利用Matlab軟件對(duì)細(xì)胞的心跳間期、場(chǎng)電位振幅、場(chǎng)電位持續(xù)時(shí)間、傳導(dǎo)速度及去極化過(guò)程進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)人體胚胎干細(xì)胞分化的心肌細(xì)胞在葡萄糖缺乏
14、條件下場(chǎng)電位振幅、電信號(hào)傳導(dǎo)速度和去極化過(guò)程分別從420.6μV、31.9 mm/s和2.8μV/ms增長(zhǎng)為609.8μV、89.5 mm/s和17.2μV/ms,表明心肌細(xì)胞在葡萄糖缺乏條件下成熟度得到了很大提高,說(shuō)明葡萄糖缺乏能夠促進(jìn)心肌細(xì)胞的成熟。
(6)膀胱癌細(xì)胞的機(jī)械性質(zhì)表征研究
研究得出了一種基于單細(xì)胞層面的膀胱癌細(xì)胞機(jī)械性質(zhì)檢測(cè)法,利用原子力顯微技術(shù)研究了膀胱癌細(xì)胞在4-氨基聯(lián)苯處理下的硬度變化,發(fā)現(xiàn)細(xì)
15、胞癌變后楊氏模量均有降低。通過(guò)對(duì)原子力顯微鏡的針尖進(jìn)行精確控制,確保針尖始終按壓于細(xì)胞核的區(qū)域。利用Matlab軟件對(duì)所得的大量數(shù)據(jù)進(jìn)行了處理分析,對(duì)原子力顯微鏡獲得的力學(xué)曲線進(jìn)行分段擬合計(jì)算楊氏模量,探討了不同按壓程度下的細(xì)胞硬度,發(fā)現(xiàn)當(dāng)按壓深度從100 nm上升至1000 nm后,細(xì)胞的楊氏模量從100 kPa迅速降低至10 kPa以下。利用Origin軟件、Matlab軟件構(gòu)建了直觀二維陣列圖,發(fā)現(xiàn)圖中按壓深度峰的位置轉(zhuǎn)移能很好地
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 羥基功能化離子液體用于蛋白質(zhì)分離分析方法研究與應(yīng)用.pdf
- 咪唑類離子液體用于中草藥及蛋白質(zhì)樣品的分離分析方法研究與應(yīng)用.pdf
- 基于離子液體萃取分離蛋白質(zhì)的研究.pdf
- 離子液體用于共沸體系分離的研究.pdf
- 離子液體微乳體系-蛋白質(zhì)分離純化的研究.pdf
- 離子液體用于丙烯-丙烷分離過(guò)程的模擬研究.pdf
- 離子液體用于熒光分析的初步研究.pdf
- 離子液體用于苯和環(huán)己烷萃取分離的液液平衡研究.pdf
- 離子液體雙水相體系中藥物和蛋白質(zhì)的相互作用研究.pdf
- 負(fù)載化離子液體用于酸性氣體的分離.pdf
- 臘梅花蛋白質(zhì)分離純化及性質(zhì)研究.pdf
- 氧化石墨烯和離子液體在蛋白質(zhì)分離檢測(cè)中的應(yīng)用研究.pdf
- 酶法及離子液體雙水相提取分離菜籽粕蛋白質(zhì)的研究.pdf
- 剩余污泥中蛋白質(zhì)的分離及其性質(zhì)分析.pdf
- 聚合物固載的咪唑離子液體對(duì)蛋白質(zhì)的分離研究.pdf
- 離子液體用于脂肪烴、芳香烴萃取分離的研究.pdf
- 34256.離子液體功能化磁性納米粒子蛋白質(zhì)分離研究
- 離子液體與蛋白質(zhì)相互作用的研究.pdf
- 有機(jī)胍鹽離子液體的合成及結(jié)構(gòu)表征.pdf
- 蘋(píng)果籽蛋白質(zhì)的分離提取及功能性質(zhì)研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論