牦牛肉品質(zhì)性狀候選蛋白的篩選與鑒定.pdf

1、牦牛主要分布在青藏高原及其毗鄰的高山和亞高山地區(qū)，是當(dāng)?shù)啬撩裰饕娜馐硜碓?。傳統(tǒng)的飼養(yǎng)方式和特殊的生活環(huán)境使其形成了獨(dú)特的肉品質(zhì)。牦牛肉品質(zhì)形成的分子機(jī)制目前仍不明確。為了更好地解析牦牛肉品質(zhì)形成的遺傳調(diào)控機(jī)制，本研究以成年牦牛和黃牛的背最長肌為研究對(duì)象，利用熒光定量PCR(Q-PCR)、氣象色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-TOF-MS)、同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)(iTRAQ)等方法分析了牦牛和黃牛肌肉中肌纖維組成、代謝物和蛋白質(zhì)的差異，為傳

2、統(tǒng)放牧模式下牦牛肉品質(zhì)的選育和牦牛分子育種提供科學(xué)依據(jù)和理論支撐。
　　1.與黃牛肉相比，牦牛肉的PH45mm、a*值和系水力較高，肌內(nèi)脂肪含量較少且嫩度較低。通過分析背最長肌中不同肌纖維類型分子標(biāo)記(MyHCⅠ、MyHCⅡA、MyHCⅡX和MyHCⅡB)的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)牦牛背最長肌中Ⅰ型肌纖維（慢速氧化型）的含量顯著高于黃牛(P＜0.05)，而ⅡA型（快速氧化型）和ⅡB型肌纖維（快速酵解型）含量顯著低于黃牛(P＜0.05)。Pea

3、rson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，牦牛和黃牛MyHCⅠmRNA的表達(dá)量與PH45min值、a*和系水力呈正相關(guān)，與L*值呈顯著負(fù)相關(guān)，MyHCⅡBmRNA的表達(dá)量與a*值呈顯著負(fù)相關(guān)，與L*值呈顯著正相關(guān)，MyHCⅡA mRNA的表達(dá)量與肌內(nèi)脂肪含量呈顯著負(fù)相關(guān)。說明肌纖維組成是影響牦牛和黃牛肉品質(zhì)的重要因素。
　　2.利用GC-TOF-MS技術(shù)檢測了牦牛和黃牛背最長肌中的代謝標(biāo)志物。共篩選到17種濃度有顯著差異的代謝物，其中葡萄糖-6-磷

4、酸、2-羥丁酸、肉豆蔻酸、亞麻酸、油酸、甘露糖基甘油酸、麥芽糖、尿苷、果糖、天冬氨酸和戊二酸在牦牛背最長肌中濃度上調(diào)，黃嘌呤核、洋地黃毒糖、葡糖酸、煙酸、核糖酸，γ內(nèi)酯和谷氨酸在黃牛背最長肌中濃度上調(diào)。牦牛背最長肌中濃度上調(diào)的代謝物顯著富集在糖酵解和不飽和脂肪酸合成的代謝通路中，黃牛背最長肌中濃度上調(diào)的代謝物顯著富集在嘌呤代謝和煙酸與煙酰胺代謝通路中。相關(guān)性分析表明牦牛背最長肌中葡萄糖-6-磷酸的含量與PH45min呈顯著正相關(guān)，黃牛背

5、最長肌中煙酸含量與肌內(nèi)脂肪含量呈顯著正相關(guān)。這些結(jié)果表明，牦牛和黃牛背最長肌中的碳水化合物和脂類的代謝強(qiáng)度不同，葡萄糖-6-磷酸可作為牦牛肉PH45min的候選代謝標(biāo)志物。
　　3.利用iTRAQ和雙向電泳技術(shù)篩選了牦牛和黃牛背最長肌中的差異蛋白質(zhì)。在牦牛和黃牛背最長肌中鑒定到458種蛋白質(zhì)，大部分蛋白質(zhì)等電點(diǎn)在4-10之間，極酸性和極堿性蛋白很少。在牦牛背最長肌中表達(dá)量上調(diào)的蛋白有57種，顯著富集在三羧酸循環(huán)、脂肪酸代謝、氧化磷