牙菌斑及胃粘膜幽門螺桿菌耐藥基因檢測的臨床價值.pdf

1、目的： 本實驗通過胃粘膜取材建立等位基因特異性引物一聚合酶鏈反應法(ASP-PCR)檢測H．pylori23S rRNA基因2142及2143位置上SNPs，進而獲知H．pylori的突變耐藥情況；建立巢式PCR方法檢測牙菌斑中H．pylori的感染及其23SrRNA基因突變情況。 方法： 1、采集2006年6月至2006年11月因上消化道癥狀行胃鏡檢查的患者83例，其中包括16例慢性胃炎、60例潰瘍和7例胃癌患

2、者，男性49例，平均年齡為47歲。H．pylori的診斷依據(jù)快速尿素酶試驗、組織學檢查及<'14>C呼氣試驗，此三項中兩項陽性為H．pylori陽性患者，兩項陰性為H．pylori陰性患者。83例患者(65例H．pylori陽性，18例H．pylori陰性)的胃粘膜提取DNA，均經(jīng)過ASP-PCR和巢式PCR兩種方法擴增，巢式PCR產(chǎn)物經(jīng)BsaI和BbsI進行酶切。采用SPSSl2．0軟件包進行統(tǒng)計分析，兩種方法陽性率的比較采用x <'

3、2>檢驗。 2、收集<'14>C呼氣試驗和快速尿素酶試驗均為H．pylori陽性的患者45例，包括慢性淺表性胃炎23例，十二指腸潰瘍22例。取其牙菌斑，提取DNA，用巢式PCR方法擴增H．pylori23S rRNA的425bp片段，陽性結果用限制性內切酶BsaI和BbsI進行酶切。 結果： 1、采用ASP-PCR法65例H．pylori陽性患者58例為野生株，1例發(fā)生A2143G突變，6例為野生株與A2143

4、G突變株的混合株。所有突變株均經(jīng)測序證實。突變率10.8％，準確性100％。巢式PCR法擴增65例H．pylori陽性患者56例為陽性，18例H．pylori陰性患者17例為陰性。對57例巢式PCR陽性產(chǎn)物進行限制性酶切分析，有7例被Bsa I切開，表明存在A2143G的突變，無一例被Bbs I識別。所有突變株均經(jīng)測序證實。 2、45例H．pylori陽性患者25例牙菌斑在第一輪PCR擴增出了H．pylori 23S rRNA

5、617bp的片斷，(陽性擴增率為55．6％)，而28例在第二輪PCR擴增出了425bp的片段(陽性擴增率為62.2％)。對28例巢式PCR陽性產(chǎn)物進行限制性酶切分析，有1例被Bsa I切開，表明存在A2143G的突變，無一例被Bbs I識別。所有突變株均經(jīng)測序證實。 結論： 1、采用ASP-PCR方法可以簡便的檢測到胃粘膜中H．pylori23S rRNA的SNPs(2142、2143位置上腺嘌呤突變?yōu)轼B嘌呤)，不需要酶