DC-SIGN在HIV感染者中變異情況及其啟動子體外表達研究.pdf

1、DC-SIGN是樹突狀細胞的表面分子,在HIV感染的過程中起重要的作用.DC-SIGN的結(jié)構包括胞內(nèi)段,跨膜區(qū),頸區(qū)(又稱為重復序列區(qū))和糖基識別域四個部分.國外一項對835例高加索人的研究認發(fā)現(xiàn)DC-SIGN重復序列區(qū)由6-8個相同的蛋白重復序列組成,其中7個重復序列的基因型在人群中占99.52﹪,為基因型的野生型.頸區(qū)基因重復序列起穩(wěn)定DC-SIGN結(jié)構的作用.頸區(qū)重復序列的數(shù)目的變異,會影響DC-SIGN結(jié)構的穩(wěn)定性,因此可能對D

2、C-SIGN的功能造成潛在的影響.國外的一項研究發(fā)現(xiàn)DC-SIGN純合基因7/7R在HIV感染者中較多,而7/5R.等雜合基因未在HIV感染者中出現(xiàn),認為7/7R.純合子型基因是HIV易感型基因,而雜合子基因變異則能降低HIV感染的風險.為進一步明確DC-SIGN重復序列區(qū)變異對HIV感染的影響,我們設計DC-SIGN 特異引物,通過PCR 方法, 對119例中國HIV感染者和120例正常對照的DC-SIGN基因重復序列進行進行擴增,通

3、過瓊脂糖凝膠電泳和測序,分析DC-SIGN重復序列區(qū)變異情況.我們發(fā)現(xiàn)在HIV感染者有3種基因變異,而在正常對照人群出現(xiàn)5種基因型變異.統(tǒng)計學分析結(jié)果提示,在HIV感染者和正常人群間,DC-SIGN基因型分布無明顯差異,同時雜合型DC-SIGN也在兩組人群中分布也未見明顯差異.另外,我們對在132例德國HIV感染者調(diào)查后發(fā)現(xiàn)有9種DC-SIGN變異(包括5種DC-SIGN雜合變異).我們的研究結(jié)果顯示:與以前的報道不同,DC-SIGN雜

4、合變異可以在HIV 感染者中出現(xiàn);在中國人群,DC頸區(qū)雜合基因可能不具有降低HIV感染的風險.基因的啟動子是調(diào)控基因表達的重要調(diào)控元件,與基因的表達水平和表達效率密切相關.DC-SIGN在體內(nèi)局限表達皮膚和淋巴結(jié)等組織的DCs上.DC-SIGN在體內(nèi)特異性表達,與其表達調(diào)節(jié)機制有關.為研究DC-SIGN啟動子生物活性特征,我們分離DC-SIGN基因啟動子,然后構建到熒光素酶報告載體中pGL3-Basic和pGL3-Enhancer中,分

5、別轉(zhuǎn)染貼壁細胞,通過測定細胞中熒光素酶活性,來檢測DC-SIGN基因啟動子在體外表達系統(tǒng)的活性.我們在體外實驗發(fā)現(xiàn)DC-SIGN基因啟動子是個弱啟動子,在增強子存在的情況下,僅僅能誘導低水平的DC-SIGN表達. DC-SIGN基因啟動子位于DC-SIGN基因5'端的+251-+487的核酸區(qū)域中,包含NF-кB等五個核轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點.為進一步研究DC-SIGN基因啟動子的調(diào)節(jié)特征,我們構建了NF-кB位點缺失的DC-SIGN

6、基因啟動子熒光素酶報告載體,然后分別將將該報告載體和NF-кBp50表達載體轉(zhuǎn)染到THP-1細胞中,觀察NF-кB和IL-4對DC-SIGN基因啟動子功能的影響以及IL-4與NF-кBp50間的相互影響.我們發(fā)現(xiàn),NF-кB位點突變能使DC-SIGN基因啟動子活性降低大約50﹪,但是并沒有將啟動子活性完全消除.體外表達NF-кBp50在THP-1中能誘導DC-SIGN的表達.提示在THP-1細胞中,DC-SIGN表達和NF-кBp50表