人DC-SIGN重組蛋白的表達、抗體制備及其應用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:為建立人 DC-SIGN雙抗體夾心 ELISA方法,制備抗 DC-SIGN兔源多克隆抗體和鼠源單克隆抗體。以制備的多克隆抗體和單克隆抗體為基本檢測試劑,進行檢測 DC-SIGN的雙抗體夾心 ELISA方法。
　　方法:(1)以 PBMC為模板用RT-PCR方法擴增人 DC-SIGN基因,構建真核表達質(zhì)粒 pcDNA-DC-SIGN和原核表達質(zhì)粒 pET28a-DC-SIGN(ER)。(2)用純化的DC-SIGN胞外區(qū)蛋白免疫

2、日本大耳白兔,制備多克隆抗體。通過酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測抗體效價,免疫熒光法檢測其特異性。(3)以純化的重組人 DC-SIGN胞外區(qū)蛋白免疫 Balb/C小鼠,通過細胞融合技術,間接 ELISA篩選和3次以上細胞克隆,獲得穩(wěn)定分泌抗 DC-SIGN蛋白單克隆抗體雜交瘤細胞株,制備單克隆抗體。(4)以獲得的多克隆抗體和單克隆抗體為基本檢測試劑,進行了雙抗體夾心 ELISA方法的探索。
　　結(jié)果:(1)成功構建人 DC-S

3、IGN的原核表達質(zhì)粒 pET28a-DC-SIGN(ER)和真核表達質(zhì)粒 pcDNA-DC-SIGN。(2)使用純化后的重組 DC-SIGN胞外區(qū)蛋白免疫日本大耳白兔制備兔抗體 DC-SIGN胞外區(qū)蛋白的多克隆抗體。ELISA結(jié)果顯示,制備的抗體效價達到了1:32000,Western Bloting結(jié)果表明,制備的多克隆抗體能特異性與人DC-SIGN重組蛋白結(jié)合,具有良好的反應原性。(3)成功獲得穩(wěn)定分泌抗人 DC-SIGN單克隆抗體

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