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文檔簡介
1、目的:
(1)通過體外研究吉非替尼序貫或聯(lián)合培美曲塞對EGFR不同類型的人肺腺癌細胞A549、PC-9的生長抑制作用及其對細胞凋亡的影響,探索吉非替尼與培美曲塞的最佳用藥方式。
(2)通過體外研究吉非替尼序貫或聯(lián)合欖香烯乳對EGFR不同類型的人肺腺癌細胞A549、PC-9的生長抑制作用及其對細胞凋亡的影響,探討欖香烯乳對吉非替尼能否起到增效、增敏作用,以及兩藥聯(lián)用的最佳方式。
方法:
2、 體外培養(yǎng)EGFR野生型人肺腺癌細胞A549及EGFR突變型人肺腺癌細胞PC-9,通過不同方法分別檢測吉非替尼與培美曲塞、吉非替尼與欖香烯乳序貫或聯(lián)合對兩種細胞系的生長抑制及誘導(dǎo)凋亡作用,具體包括:(1)MTT法檢測不同濃度和作用時間的吉非替尼、培美曲塞及欖香烯乳單藥對細胞的增殖抑制效應(yīng),繪制濃度-生長抑制曲線,計算半數(shù)抑制濃度(IC50);(2)MTT法檢測吉非替尼序貫或聯(lián)合培美曲塞、吉非替尼序貫或聯(lián)合欖香烯乳對兩種細胞的增殖抑制作
3、用,采用兩藥相互作用系數(shù)(CDI)和合用指數(shù)(CI)評價各實驗組兩藥相互作用性質(zhì);(3)Annexin-VFITC/PI雙標記染色法檢測各實驗組對細胞凋亡的影響:(4)原位末端標記法(TUNEL)觀察各實驗組的細胞凋亡情況。
結(jié)果:
第一部分:(1)吉非替尼和培美曲塞單藥對人肺腺癌細胞PC-9、A549的增殖抑制效應(yīng)呈濃度與時間依賴性。吉非替尼作用于PC-9細胞(EGFR突變型)72h時的IC50為0.044
4、±0.002μmol/L,作用于A549細胞(EGFR野生型)72h時的IC50為8.642±0.261μmol/L,其值是前者IC50的近200倍。培美曲塞對PC-9及A549細胞72h的IC50分別為0.346±0.104μg/ml和0.982±0.111μg/ml。(2)吉非替尼聯(lián)合培美曲塞、培美曲塞序貫吉非替尼均可以增強吉非替尼和培美曲塞兩藥對兩種細胞的增殖抑制效應(yīng),且與兩單藥相比差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),而吉非替尼
5、序貫培美曲塞的生長抑制率較兩單藥降低。對EGFR突變型人肺腺癌細胞PC-9,吉非替尼聯(lián)合培美曲塞組的生長抑制率高于培美曲塞序貫吉非替尼組(P<0.05),且聯(lián)合組兩藥具有相加性;對EGFR野生型人肺腺癌細胞A549,培美曲塞序貫吉非替尼給藥對細胞的增殖抑制作用優(yōu)于吉非替尼聯(lián)合培美曲塞組(P<0.05),且培美曲塞序貫吉非替尼組兩藥具有相加性。(3)吉非替尼聯(lián)合培美曲塞對PC-9細胞的總凋亡率最高,與兩單藥組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.
6、05);培美曲塞序貫吉非替尼對A549細胞的總凋亡率最高,與其它各組相比差異顯著(P<0.05):吉非替尼序貫培美曲塞對兩種細胞的凋亡率低于兩單藥。
第二部分:(1)吉非替尼和欖香烯乳單藥對人肺腺癌細胞PC-9、A549的增殖抑制效應(yīng)呈濃度與時間依賴性。欖香烯乳對PC-9及A549細胞72h的IC50分別為26.461±2.309μg/ml和27.830±0.614μg/ml。(2)吉非替尼序貫或聯(lián)合欖香烯乳對兩種細胞的增
7、殖抑制效應(yīng)均較兩單藥增加,且呈現(xiàn)吉非替尼聯(lián)合欖香烯乳>欖香烯乳序貫吉非替尼>吉非替尼序貫欖香烯乳的特點。吉非替尼聯(lián)合欖香烯乳組對PC-9和A549細胞的抑制率與其它各組相比差異均存在統(tǒng)計學意義(P<0.05),且聯(lián)合組兩藥表現(xiàn)為協(xié)同性。在PC-9和A549細胞中,吉非替尼聯(lián)合欖香烯乳后吉非替尼的IC50較吉非替尼單用時分別降低了68.33%和69.16%。(3)吉非替尼序貫或聯(lián)合欖香烯乳對兩種細胞的凋亡率均有所增加,吉非替尼聯(lián)合欖香烯乳
8、給藥的誘導(dǎo)凋亡效應(yīng)最明顯,與其它各組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
結(jié)論:
第一部分:吉非替尼聯(lián)合培美曲塞、培美曲塞序貫吉非替尼均可以增強吉非替尼和培美曲塞兩藥對PC-9和A549細胞的增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡效應(yīng),吉非替尼序貫培美曲塞反而降低兩藥對兩種細胞的生長抑制率及凋亡率。對EGFR突變型人肺腺癌細胞PC-9,吉非替尼聯(lián)合培美曲塞的增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡作用更顯著:對EGFR野生型人肺腺癌細胞A549,培
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