吉非替尼聯(lián)合化療對人肺腺癌細(xì)胞SPC-A1生長的影響及其機(jī)制探討.pdf

1、背景與目的：近幾年發(fā)現(xiàn)的新一代化療藥(紫杉醇、多西紫杉醇、健擇和諾維本)與鉑類聯(lián)合的雙藥化療是目前晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的一線標(biāo)準(zhǔn)治療方案。雖然療效肯定,但存在兩個問題：1、治療效果已經(jīng)達(dá)到了一個平臺,疾病控制率為40％左右,1年生存率30-40％；2、對腫瘤組織的選擇性不強(qiáng),多伴有明顯的毒副反應(yīng),限制了它們在老年及身體狀態(tài)較差患者中的應(yīng)用。因此,尋找高效、低毒的抗癌藥成為醫(yī)學(xué)界面臨的課題。近年,以吉非替尼為代表的表皮生長因子受

2、體酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKIs)等多種分子靶向藥物已應(yīng)用于NSCLC治療,可以延長患者生存期和疾病進(jìn)展時間,改善癥狀。分子靶向藥物的優(yōu)點是低毒性,缺點是有效率不高。鑒于分子靶向藥物的作用機(jī)制與化療藥物不同,理論上將吉非替尼與這類藥物聯(lián)合應(yīng)用應(yīng)該會產(chǎn)生協(xié)同作用,但臨床試驗卻發(fā)現(xiàn)吉非替尼與紫杉醇/卡鉑或健擇/順鉑同時使用治療晚期NSCLC時,對比化療并無臨床獲益。如何使EGFR-TKIs與上述化療藥聯(lián)合使用產(chǎn)生增效作用是目前的研究熱

3、點。基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)對膀胱癌細(xì)胞,吉非替尼和化療的聯(lián)合應(yīng)用是否有協(xié)同抑瘤作用與給藥次序有關(guān)[1]。本實驗觀察吉非替尼與紫杉醇、多西紫杉醇及培美曲塞以不同方式聯(lián)合應(yīng)用對人肺腺癌細(xì)胞SPC-Al生長及細(xì)胞周期的影響,探索它們聯(lián)合序貫用藥是否比單藥化療更有效及其可能的細(xì)胞學(xué)機(jī)制。 方法:RT-PCR法和Westernblotting法檢測SPC-Al細(xì)胞及A549細(xì)胞中EGFRmRNA和EGFR蛋白表達(dá)；四甲基偶氮唑鹽[3-(4,5-di

4、me thylthiazol-2-y1)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT]顯色分光光度法測細(xì)胞增殖；流式細(xì)胞術(shù)測細(xì)胞周期。分別觀察化療藥物與吉非替尼單獨、同時及間隔24小時序貫作用。 結(jié)果:SPC-Al細(xì)胞及A549細(xì)胞中有EGFRmRNA及EGFR蛋白表達(dá),且SPC-Al細(xì)胞中其表達(dá)量均呈過表達(dá)；在10-13M～10-6M(吉非替尼、紫杉醇、多西紫杉醇)和10-12M-10-5M(培美

5、曲塞)濃度范圍內(nèi),吉非替尼與化療藥物均明顯抑制SPC-Al細(xì)胞生長,作用呈濃度依賴性和時間依賴性,IC50分別為：2.6nM(多西紫杉醇)、19.6nM(紫杉醇)、61.2nM(吉非替尼)和27.1nM(培美曲塞)。四種藥物在IC50濃度下均作用96h時對SPC-Al生長達(dá)最大抑制效果。吉非替尼與化療藥物聯(lián)合作用對細(xì)胞生長的影響與給藥的次序有關(guān)：跟單藥組相比,同時給藥或先用吉非替尼后用化療藥(紫杉醇、多西紫杉醇、培美曲塞)組對抑制細(xì)胞生

6、長無顯著增強(qiáng)作用(P>0.05),先用化療藥(紫杉醇、多西紫杉醇、培美曲塞)后用吉非替尼組對抑制細(xì)胞生長有明顯增強(qiáng)作用(P<0.05)。 細(xì)胞周期研究顯示：化療藥(紫杉醇、多西紫杉醇、培美曲塞)和吉非替尼作用于不同的細(xì)胞周期。紫杉醇和多西紫杉醇將SPC-A1細(xì)胞阻滯于G2期,培美曲塞將細(xì)胞周期阻滯在S期而吉非替尼將SPC-A1細(xì)胞阻滯于G1期。先用吉非替尼后用紫杉醇或多西紫杉醇組G1期細(xì)胞顯著增多(P<0.05),而G2期細(xì)胞顯

7、著減少(P<0.05)。先用吉非替尼后用培美曲塞組G1期細(xì)胞顯著增多(P<0.05),S期和G2期細(xì)胞顯著減少(P<0.05)。先用紫杉醇或多西紫杉醇后用吉非替尼組G2期細(xì)胞顯著增多而G1期細(xì)胞顯著減少(P<0.05)。先用培美曲塞組后用吉非替尼組G1期細(xì)胞顯著減少(P<0.05),而S期細(xì)胞顯著增多(P<0.05)。 結(jié)論：化療藥物(紫杉醇、多西紫杉醇、培美曲塞)和吉非替尼都能抑制SPC-A1細(xì)胞生長,化療藥物與吉非替尼聯(lián)合作

8、用對細(xì)胞生長的影響與給藥次序有關(guān),同時給藥或先用吉非替尼后用化療藥物(紫杉醇、多西紫杉醇、培美曲塞)對抑制細(xì)胞生長無顯著增強(qiáng)作用,先用化療藥物(紫杉醇、多西紫杉醇、培美曲塞)后用吉非替尼對抑制細(xì)胞生長有明顯增強(qiáng)作用。同時給藥或先用吉非替尼后用化療藥物(紫杉醇、多西紫杉醇、培美曲塞)對抑制細(xì)胞生長無顯著增強(qiáng)作用可能與它們對細(xì)胞周期的影響相關(guān),先用化療藥物(紫杉醇、多西紫杉醇、培美曲塞)后用吉非替尼對抑制細(xì)胞生長的增強(qiáng)作用可能與對細(xì)胞周期的