未甲基化CpG寡核苷酸誘導人PBMC抗膀胱腫瘤細胞的實驗研究.pdf

1、背景與研究目的：未甲基化CpG基序的寡核苷酸CpGODN通過結(jié)合Toll樣受體9(TLR9)可誘導漿細胞樣樹突狀細胞(PDC)活化，促進其在歸巢的同時由未成熟狀態(tài)向成熟狀態(tài)轉(zhuǎn)化，并有效地提呈抗原，增加共刺激分子的表達，提供T細胞活化需要的第二信號；另外，CpGODN誘導PDC釋放細胞因子IFN-α、同時在CD40L的協(xié)助下釋放IL-12，由此引發(fā)T細胞向Th1方向分化并活化NK細胞，釋放IFN-γ，啟動先天性免疫和獲得性免疫。本研究旨在

2、探討CpGODN在誘導人PBMC增殖、抗腫瘤細胞因子的釋放、淋巴細胞表型的變化與誘導人PBMC對膀胱腫瘤細胞的殺傷作用。探索CpG寡核苷酸的抗腫瘤作用，并作為膀胱腫瘤免疫治療新策略的可行性。 方法：1.采用MTT法測定A型CpGODN2216和B型CpGODN2006作用后人PBMC淋巴細胞增殖；2.采用定量酶聯(lián)法檢測梯度濃度CpGODN作用后人PBMC產(chǎn)生IFN-α、IL-12、IFN-γ、TNF-α的變化；3.流式細胞儀檢測

3、梯度濃度CpGODN作用后人PBMC中NK細胞、B細胞、CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞的活化表型CD69表達以及漿樣樹突狀細胞比例的變化；4.HLA法檢測CpGODN誘導后人PBMC對T24膀胱腫瘤細胞的殺傷作用。 結(jié)果：1.CpG寡核苷酸能夠有效地引起人PBMC的增殖，高劑量組OD值約為RPMI1640對照組的2倍，在實驗的濃度范圍內(nèi)其作用隨CpG寡核苷酸濃度增高而上升。2.CpG寡核苷酸作用后人PBMC分泌IFN-α

4、、IL-12、IFN-γ、TNF-α含量上升。A型CpGODN明顯誘導細胞釋放IFN-α。3.CpG寡核苷酸作用細胞人PBMC后，NK細胞、B細胞、CD4+T和CD8+T淋巴細胞表達CD69的比例增加；B型CpGODN對表達CD20的B細胞有明顯的活化作用，而A型CpGODN對B細胞有間接的活化作用；各組間漿樣樹突狀細胞比例無明顯的變化。4.CpG寡核苷酸作用后，人PBMC對T24膀胱腫瘤細胞的殺傷活性明顯升高。 結(jié)論：1.Cp