側腦室注射pLXSN-bcl-2 cDNA對局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)細胞凋亡、腦梗死體積及bcl-2-bax蛋白表達影響的動態(tài)研究.pdf

1、目的:前言腦缺血以后神經(jīng)細胞死亡的形式之一即是細胞凋亡,bcl-2基因(B-celllymphoma/leukemia-2 gene)作為一種抗凋亡基因,在大量研究中證明對缺血性腦損傷后神經(jīng)細胞具有保護作用,bax基因(bcl-2 associated x gene)被認為是一種凋亡促進基因,與bcl-2共同調(diào)節(jié)凋亡.隨著分子生物學和基因工程的發(fā)展,基因治療可能為臨床治療腦梗死提供一個新思路、新方法.目前基因治療腦梗死的實驗研究多采用病

2、毒載體,多因其安全性難以保障,很難應用于臨床.該實驗組此前的研究曾將質(zhì)粒pLXSN介導的人bcl-2基因直接注射于大鼠腦梗死周圍區(qū),即相當于缺血半暗帶腦細胞旁,證明其可以安全、有效的抑制局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)細胞凋亡.但由于局部直接注射的轉基因方式創(chuàng)傷性大,且不易于使轉入的基因在全腦內(nèi)發(fā)揮作用,所以不適于臨床應用.為了尋求更加方便、快捷、安全、有效的治療方法,該研究以質(zhì)粒pLXSN作為載體轉染人bcl-2 cDNA,經(jīng)側腦室注入大鼠大腦中

3、動脈梗塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,觀察缺血再灌注不同時間點的腦梗死體積、bcl-2/bax蛋白表達、細胞凋亡的動態(tài)變化情況,探討質(zhì)粒pLXSN介導人bcl-2基因在局灶性腦缺血中的腦保護作用,為臨床治療腦梗死提供實驗依據(jù).方法依照常規(guī)的分子生物學方法鑒定、提取及擴增質(zhì)粒pLXSN和質(zhì)粒pLXSN-bcl-2.將180只大鼠均采用Zea-longa線栓法制成大鼠MCAO模型,隨機分

4、為3組:生理鹽水組(n=60)、空載質(zhì)粒組(n=60)和bcl-2組(n=60).采用立體定位的方式于MCAO后立即經(jīng)側腦室分別注入生理鹽水、質(zhì)粒pLXSN和質(zhì)粒pLXSN-bcl-20μl.采用TTC染色、免疫組織化學、原位末端標記(TUNEL)法分別觀察并檢測腦缺血再灌注3h、6h、24h、48h、72h后的腦梗死體積、bcl-2/bax蛋白表達和神經(jīng)元凋亡狀況.結論局灶性腦缺血后,經(jīng)側腦室注入質(zhì)粒pLXSN介導人bcl-2 cDN