頸動脈注射質(zhì)粒pLXSN-bcl-2對大鼠局灶性腦缺血后熱休克蛋白70表達(dá)影響的研究.pdf

1、Bcl-2蛋白能抑制凋亡，用bcl-2轉(zhuǎn)基因技術(shù)可使動物模型腦梗死體積縮小，轉(zhuǎn)bcl-2基因治療缺血性腦血管病的研究尚處于探究階段，其中載體和基因?qū)送緩降倪x擇是該治療能否臨床應(yīng)用的關(guān)鍵。幾種載體中質(zhì)粒因其安全性高，外源基因容量大等優(yōu)勢正受到人們關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)用質(zhì)粒pLX-SN介導(dǎo)bcl-2基因，經(jīng)短暫腦缺血大鼠的頸內(nèi)動脈注入大腦，研究bcl-2基因在局灶性腦缺血中的腦保護(hù)作用。大量實(shí)驗(yàn)證明熱休克蛋白70(Heatshock protei

2、n 70，Hsp70)對缺血性腦損傷有神經(jīng)保護(hù)作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)hsp70蛋白的生物學(xué)特性與腦缺血耐受有關(guān)。而hsp70與bcl-2之間存在的某些聯(lián)系有利于對轉(zhuǎn)bcl-2基因治療缺血性腦梗死的作用機(jī)制進(jìn)一步探討。因此，本實(shí)驗(yàn)欲觀察bcl-2的過度表達(dá)能否引起hsp70蛋白表達(dá)的變化，為進(jìn)一步探討二者之間的關(guān)系提供依據(jù)。 參照改良的Longa栓線法<'[1]>構(gòu)建大鼠局灶性腦缺血模型，缺血二小時(shí)后將栓線拔出，經(jīng)頸內(nèi)動脈向大鼠腦內(nèi)

3、分別注人質(zhì)粒PLXSN-bcl-2(260ul)，空質(zhì)粒PLXSN(260ul)和生理鹽水(260ul)。存活的各組大鼠分別再灌注3小時(shí)，24小時(shí)，48小時(shí)，72小時(shí)，在各時(shí)間點(diǎn)將大鼠斷頭取大腦。用免疫組織化學(xué)方法觀察bcl-2蛋白和hsp70蛋白表達(dá)情況，及梗死體積測定。再灌注3小時(shí)大鼠腦內(nèi)即可見bcl-2蛋白，hsp70蛋白表達(dá)，表達(dá)逐漸增加，均在再灌注24小時(shí)達(dá)到高峰，再灌注48小時(shí)、72小時(shí)表達(dá)逐漸降低，二者均在梗死灶周圍大腦

4、皮質(zhì)以及對損傷比較敏感的海馬、尾狀核和丘腦的部分區(qū)域表達(dá)最強(qiáng)。但bcl-2組兩種蛋白的表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均較對照組(空質(zhì)粒組和生理鹽水組)強(qiáng)，而注射空質(zhì)粒和生理鹽水的兩個(gè)對照組之間兩種蛋白的表達(dá)在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均無差異。Bcl-2組可見bcl-2蛋白在全腦廣泛表達(dá)，而對照組僅在梗死灶周圍少量表達(dá)。Bcl-2組梗死體積小于兩個(gè)對照組。 1．大鼠頸內(nèi)動脈注射質(zhì)粒PLXSN-bcl-2后，局灶性缺血大鼠腦組織中廣泛表達(dá)bcl-2蛋白，