hS100A6對腫瘤細胞的生物學作用研究.pdf

1、重慶醫(yī)科大學碩士學位論文hS100A6對腫瘤細胞的生物學作用研究姓名：陳英華申請學位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學指導教師：周蘭20090501重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文提供實驗依據。方法：1重組hSl00A6的制備：用氯化鈣法將已經構建的pGSTmoluc和pGSTmoluchS100A6質粒轉化表達宿主大腸桿菌BL21；用異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導其表達；冰上超聲裂解細菌后，用谷胱甘肽瓊脂糖4B球珠(GlutathioneSep

2、harose4Bbeads)從細菌裂解液中分離純化GST和GSThS100A6，并通過十二烷基磺酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodiumdodecylsulfate—polyacrylamidegelelectrophoresis，SDSPAGE)和QuantityOne軟件鑒定和分析純化效果，Western—blot法鑒定重組蛋白，BCA方法進行蛋白定量，分裝后80℃保存?zhèn)溆谩?用不同濃度的GSThSl00A6干預所選的各個細胞株，MT

3、T法檢測hSl00A6對各細胞株增殖的影響。3根據上一部分試驗結果，選取一個合適的蛋白濃度，用GSThS100A6干預各細胞株，臺盼藍染色活細胞計數法檢測hS100A6對細胞增殖作用的時間依賴性。4Westernblot、免疫細胞化學法及免疫熒光法檢測檢測hS100A6干預后各腫瘤細胞中13catenin的表達水平及分布變化。5pTOPLUC轉染各腫瘤細胞株后，用GSThSl00A6處理細胞，通過熒光素酶活性分析探討hS100A6對Wn