血栓微顆粒誘導(dǎo)大鼠冠狀動脈微血栓形成及其代償機(jī)制的研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過將大鼠自體微栓顆粒栓塞冠脈微血管建立微循環(huán)障礙的模型，模擬臨床患者發(fā)作心絞痛而大冠脈無有意義狹窄的情況；觀察不同時(shí)期缺血心肌中fgl2凝血酶原酶(fgl2)、血管性血友病因子(vWF)的表達(dá)，探討冠脈微栓子阻塞微血管后微循環(huán)障礙的可能發(fā)生機(jī)制；同期觀察缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF1α)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá)及心肌毛細(xì)血管密度的變化，探討局部缺氧刺激對促發(fā)心肌側(cè)枝循環(huán)形成和建立的影響。 方法：SD大鼠隨

2、機(jī)分為自體血栓組、生理鹽水組和正常對照組。取鼠尾血制作自體微栓顆粒，通過主動脈根部注入自體微栓顆粒懸液建立冠脈微循環(huán)障礙模型。于術(shù)后1h、24h、1w、2w、3w和4w取老鼠心室組織標(biāo)本，HE染色、光鏡下觀察心內(nèi)膜下冠脈微血管血栓形成情況，判斷模型建立是否成功；酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法(ELISA)檢測血清中vWF含量；RT-PCR檢測缺血心肌中fgl2mRNA及HIF1αmRNA的表達(dá)；并通過免疫組化檢測HIF1α、VEGF蛋白表達(dá)情

3、況及心肌毛細(xì)血管密度的變化。 結(jié)果：(1)病理結(jié)果顯示冠脈微血栓模型建立成功，光鏡下觀察心肌小動脈、小靜脈及毛細(xì)血管中可見混合血栓或白色血栓的存在，自體血栓組老鼠冠脈微循環(huán)內(nèi)微栓子的數(shù)量明顯較生理鹽水和正常對照組多，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)冠脈微栓塞后1h時(shí)缺血心肌組織fgl2mRNA的表達(dá)達(dá)高峰，后1w、2w、3w、4w時(shí)表達(dá)明顯下降，但仍有持續(xù)表達(dá)，且與血清中vWF含量變化高度相關(guān)。(3)冠脈微栓塞后1h、24h時(shí)缺血心肌組織

4、HIF1αmRNA呈陽性表達(dá)，且同期HIF1α蛋白亦呈陽性表達(dá)，主要位于心肌細(xì)胞核中。(4)冠脈微栓塞后VEGF蛋白表達(dá)在第2w、第3w時(shí)增加明顯，第4w時(shí)下降至正常水平的陽性表達(dá)，其分布于心肌細(xì)胞、動脈平滑肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿，且以后者為主。(5)冠脈微栓塞后第2w、第3w時(shí)心肌毛細(xì)血管密度明顯增加，第4w時(shí)下降至正常水平。 結(jié)論：①冠脈自體微血栓模型的成功建立為以后研究微循環(huán)障礙機(jī)制提供一個經(jīng)濟(jì)、方便且有效可行的實(shí)驗(yàn)平臺

5、。②fgl2mRNA表達(dá)陽性提示其可能參與冠脈微血栓的形成，可能是發(fā)生冠脈原位血栓的機(jī)制之一，為進(jìn)一步探討fgl2在冠脈微血栓中的作用提供一個實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。同期的vWF血漿含量變化提示在微循環(huán)障礙的發(fā)生機(jī)制可能存在因內(nèi)皮損傷觸發(fā)的經(jīng)典內(nèi)源性凝血途徑因素參與。③缺血心肌中HIF1α和其下游基因VEGF的表達(dá)增加，及相應(yīng)心肌毛細(xì)血管密度明顯增加，提示冠脈微血栓形成后引起冠脈微循環(huán)障礙，低氧刺激信號觸發(fā)HIF1α轉(zhuǎn)錄并上調(diào)VEGF表達(dá)，促進(jìn)血管內(nèi)