人源菌群仔豬模型的建立及其分子生態(tài)學(xué)研究.pdf

1、上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文人源菌群仔豬模型的建立及其分子生態(tài)學(xué)研究姓名：龐小燕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：趙立平20051001上海交通人學(xué)博士學(xué)位論文摘要個(gè)體被選定為建立HFA仔豬模型的供體)的腸道擬桿菌TGGE條帶所代表的擬桿菌種類進(jìn)行了確認(rèn)。這些條帶代表的序列在GenBank中分別與脆弱擬桿菌(Bacteroidesfragilis)、普通擬桿菌@v比忉ms)、糞擬桿菌假caccae)、單形擬桿菌阻unif

2、ormis)、擬桿菌亞種阻sp)AR20同源性最高。分析中還發(fā)現(xiàn)了3種可能代表擬桿菌新種的DNA序列。這種新發(fā)展的擬桿菌類群特異性PCRTGGE技術(shù)簡(jiǎn)便、重復(fù)性強(qiáng)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)大量人和動(dòng)物腸道內(nèi)擬桿菌組成的快速、準(zhǔn)確分析以及動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。按照同樣的方法、思路，本研究也對(duì)人腸道中與健康密切相關(guān)的雙歧桿菌的組成進(jìn)行了分析，同樣也發(fā)現(xiàn)不同健康人腸道中雙歧桿菌的組成有宿主特異性。對(duì)選定為HFA仔豬模型的供體的腸道雙歧桿菌的組成分析顯示，該個(gè)體腸道內(nèi)含有

3、兩權(quán)雙歧桿菌(Bifidobacteriumbifidum)、嬰兒雙歧桿菌阻infantis)、長(zhǎng)雙歧桿菌∞10ngum)、青春雙歧桿菌但adolescentis)、假小鏈雙歧桿菌僻pseudocatenulatum)及一種可能的新種，其中假小鏈雙歧桿菌為最優(yōu)勢(shì)的種類，占雙歧桿菌總數(shù)的513％。青春雙歧桿菌和兩權(quán)雙歧桿菌也是該個(gè)體腸道內(nèi)雙歧桿菌的主要類型，各占20％和188％。較之傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法，這種基于雙歧桿菌特異性PCR基礎(chǔ)上的TG

4、GE分析技術(shù)更為靈敏、直觀。以上這兩種針對(duì)擬桿菌和雙歧桿菌的分子分析方法的建立，不僅有助于了解健康人腸道中這兩類重要菌群的組成，也為下面對(duì)比和分析HFA仔豬腸道菌群的組成特點(diǎn)提供了一種可行的方法體系。我們選用一10歲健康兒童(男)為構(gòu)建HFA仔豬模型的供體，采集該個(gè)體的新鮮糞便樣品制備菌懸液，接種飼養(yǎng)于恒溫、恒濕的高效空氣過(guò)濾屏障系統(tǒng)的剖腹產(chǎn)仔豬。通過(guò)4窩剖腹產(chǎn)仔豬共28頭個(gè)體的飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，本研究建立了使剖腹產(chǎn)無(wú)菌仔豬腸道中定植人腸道菌群