桃樹(shù)中β-半乳糖苷酶基因cDNA克隆和表達(dá)分析.pdf

1、安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文桃樹(shù)中β-半乳糖苷酶基因cDNA克隆和表達(dá)分析姓名：卞偉華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：江昌俊20050601A b s t r a c tT h e r ea r e a b u n d a n t b e t a ·g a l a c t o s i d a s e s i n p l a n t ．T h e d i f f e r e n t c o n t e n t i n e v

2、 e r yp e r i o d t a k e av e r yi m p o r t a n t p a r ti n m a t u r e ，f l a v o r , c o l o u ra n d m a n u f a c t u r ea R e rp l u c k e d ．I n t h i sp a p e r , t h ec o m p l e t ec D N A s e q u e n c eo f

3、b e t a - g a l a c t o s i d a s ew a s c l o n e di nt h ep e a c hl e a f a tt h e f i r s t t i m ea n di t w a s e x p r e s s e d i n E ．c o l i ．T h i sc o n t r i b u t e dt o m a k ec l e a rt h em e c h a n i s

4、 mo f t h em a t u r eo f f r u i t sa n d v e g e t a b l e sa s w e l la so ft h ef o r m a t i o no ff l a v o r ．I ta l s o e s t a b l i s h e d t h ef o u n d a t i o nt h a t u s i n g b i o t e c h n o l o g yt o

5、 p r o d u c e t h ep o p u l a rf r u i t sa n dv e g e t a b l e s ．T h e b e t a - g a l a c t o s i d a s ef r o mp l a n tc a n b ea p p l i e d t o f o o d ，m e d i c i n e ，i m m u n i t y ,e n v i r o n m e n t p

6、 r o t e c t i o n e t c ．T o t a l R N A f r o my o u n g l e a v e so f p e a c hw a s e x t r a c t e db yc h o m c z y n s k ’s i n g l es t e pm e t h o do fR N A i s o l a t i o n ，w h i c hw a sp a r t i a l l y m

7、 o d i f i e do n t h eb a s i so ft h ef e a t u r e so fb i o c h e m i s t r yc o m p o s i t i o ni n f r e s hp e a c hl e a v e s ．T h ed e g e n e r a t ep r i m e r sw e r ed e s i g n e da n d s y n t h e s i z

8、e da c c o r d i n g t o t h e h i g h l y c o n s e r v a t i v e s e q u e n c e s a m o n gt h e k n o w nb e t a —g a l a c t o s i d a s eg e n e s ．Ac D N A f r a g m e n to f3 8 7 b pw a sa m p l i f i e db yR T &

9、#183;P C R ，w h i c hw a s s u b s e q u e n t l y c l o n e d i n t o p M D l 8 一TV e c t o r f o rs e q u e n c i n g a n a l y s i s ．T h er e s u l t o fs e q u e n c i n ga n a l y s i ss h o w e dt h a t t h en u c

10、 l e o t i d ea n dd e d u c e da m i n o a c i d ss e q u e n c e sh a dh i g I l i d e n t i t y w i t ht h ep u b l i s h e d c o r r e s p o n d i n g p a r t so f b e t a - g a l a c t o s i d a s ec D N A s o f o t

11、 h e rp l a n t s ．T h e r e s u l t si n d i c a t e d t h a tt h es p e c i a lP C R p r o d u c t w 如p r o b a b l y ae D N A f r a g m e n to f b e t a —g a l a e t o s i d a s e i np e a c h ．T w o s p e c i a lp r

12、i m e r so fR A C E w e r ed e s i g n e db a s e do nt h e a b o v es e q u e n c eo f t h eR T ·P C R p r o d u c t ．T w o f r a g m e n t s o f 5 ’c D N A ( 8 4 0 b p ) a n d3 ’c D N A ( 2 3 4 3 b p ) w e r ea m

13、p l i f i e d b yR A C E r e a c t i o n ．T w o c o m p l e t e s e q u e n c ep r i m e r sw e r ed e s i g n e db a s e d o nt h er e s u l t o fR A C E ．A3 2 8 5 b p s e q u e n c eW a s a m p l i f i e d b y P C R ．B

14、 y t h eB l a s t p r o g r a mc o m p a r i s o n ，t h ea n a l y s i so f t h e p r o d u c t s h o w e d t h a tt h en u c l e o t i d es h a r e dm o r et h a n8 0 ％h o m o l o g o u s t o t h e c o r r e s p o n d i

15、 n gp a r t s o f b e t a - g a l a c t o s i d a s e g e n e f a m i l y o fP y r a sp y r i f o l i a , L y c o p e r s i c o ne s c u l e u t u m ．A r a b i d o p s i s t h a l i a n a , C i c e ra r i e t i n u m , V

16、 i g n a r a d i a t ee t c ．T h er e s u l t s i n d i c a t et h a t 3 2 8 5 b ps e q u e n c ei sp r o b a b l yc o m p l e t ee D N Af r a g m e n to fb e t a - g a l a c t o s i d a s e i n p e a c h ．T h en u c l e

17、 o t i d e s e q u e n c e W a sa n a l y z e db y t h e m o l e c u l a rb i o l o g ys o f t w a r e ，T h er e s u l t ss h o w s t h a tt h eo p e nr e a d i n g f r a m ei s 2 5 5 9 b pw h i c h e n c o d e s8 5 3a m