川西獐牙菜醇提物對HepG2細胞膜轉(zhuǎn)運蛋白MRP3、BSEP表達的影響.pdf

1、聚體,間接起作用。如FXR可誘導BSEP表達,RXRα可作為配體與FXR形成異二聚體,催化FXR對BSEP的調(diào)控作用,顯著提高FXR對BSEP的刺激效用,提高FXR的工作效率。
　　目前臨床上可有效治療淤膽的藥物十分有限,熊去氧膽酸雖被廣泛使用,但也存在療效個體差異大、總體療效不理想、副作用較大等缺點。因此,現(xiàn)今急需解決的問題是尋求一種更有效、更安全的治療膽汁淤積的藥物。川西獐牙菜(swertia mussitii franch)

2、是生長于高原地區(qū)的珍貴中藥,系獐牙菜屬,龍膽科植物。藏醫(yī)里常常單方治療肝臟和膽囊疾病,臨床上多可用于治療急、慢性黃疸性肝炎,但其作用機制還不十分明確。本研究的重點是川西獐牙菜能否調(diào)控細胞膜轉(zhuǎn)運蛋白MRP3和BSEP的表達,且何種核受體參與其調(diào)控,從而探討其對治療膽汁淤積的效果和機制。本實驗通過川西獐牙菜醇提物體外刺激HepG2細胞,觀測其對MRP3和BSEP在mRNA和蛋白水平的影響,并觀測核轉(zhuǎn)錄因子SP1和核受體CPF、PXR、RXR

3、α的變化狀況。目的是為治療膽汁淤積的臨床用藥提供理論依據(jù)。
　　研究方法:
　　1.不同終濃度的川西獐牙菜醇提物體外刺激HepG2細胞,運用MTT法檢測不同濃度藥物對HepG2細胞生存率影響。目的是尋找對HepG2細胞生長、增殖影響最小的濃度,即為最佳作用濃度。
　　2.選用最佳濃度川西獐牙菜醇提物于不同時間點(0h、12h、24h、48h、72h)體外刺激HepG2細胞,同時設(shè)立DMSO處理組為陰性對照,UDCA處理

4、組為陽性對照組。RT-PCR檢測在不同時間點HepG2細胞膜轉(zhuǎn)運蛋白MRP3、BSEP,核轉(zhuǎn)錄因子SP1及核受體PXR、CPF、RXRαmRNA表達的變化情況;Western blot檢測不同時間點HepG2細胞內(nèi)膜轉(zhuǎn)運蛋白MRP3、BSEP、核轉(zhuǎn)錄因子SP1及核受體PXR、CPF、RXRα蛋白表達的變化情況。
　　結(jié)果:
　　1.MTT實驗結(jié)果表明,濃度為25~50uM的川西獐牙菜醇提物對細胞生長增殖無明顯影響。
　

5、　2.RT-PCR結(jié)果顯示:同DMSO組相比,藥物刺激后HepG2細胞膜轉(zhuǎn)運蛋白MRP3 mRNA水平表達增高,但對BSEP作用不明顯,可能是通過轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)起作用,同時上調(diào)相關(guān)核受體PXR、CPF、RXRαmRNA的表達(P<0.05)。
　　3.Western blot結(jié)果表明:與陰性對照組相比,藥物處理組可明顯促進膜轉(zhuǎn)運蛋白MRP3、BSEP及相關(guān)核受體PXR、CPF、RXRα蛋白的表達(P<0.05)。其中,對MRP3、BS

6、EP蛋白水平的上調(diào)作用均強于UDCA處理組(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.川西獐牙菜醇提物可刺激HepG2細胞膜轉(zhuǎn)運蛋白MRP3 mRNA和蛋白水平的表達,且其表達增高可能與核轉(zhuǎn)錄因子SP1及核受體PXR、CPF表達上調(diào)密切相關(guān)。
　　2.HepG2細胞膜上膽鹽輸出泵BSEP蛋白水平在川西獐牙菜醇提物的刺激下顯著增高且可能和核受體RXRα高表達相關(guān)。但對BSEP mRNA水平影響不大,可能對其基因水平作用是通過