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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
1.建立從原始卵泡培育具有良好發(fā)育潛能的MⅡ卵的組織工程技術(shù)方案;
2.從原始卵泡培育MⅡ卵制備胚胎干細(xì)胞;
3.為人卵巢工程建立實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
方法:
新生0.5d小鼠卵巢切片異體移植到成年母鼠腎被膜下,21天后對(duì)宿主腹腔注射PMSG10IU/只,給藥44h后用機(jī)械穿刺法收獲卵巢移植物中的卵冠丘復(fù)合體,再通過(guò)體外成熟培養(yǎng)16h,得到的IVM-MⅡ卵進(jìn)行體外受精,受精卵發(fā)育至囊胚時(shí)從
2、內(nèi)細(xì)胞團(tuán)制備小鼠胚胎干細(xì)胞,并對(duì)建立的干細(xì)胞系進(jìn)行鑒定。
結(jié)果:
從移植切片卵巢所獲COCs在體外成熟后得到IVM-MⅡ卵,可受精并發(fā)育至囊胚分離出ICM,成功制備1批胚胎干細(xì)胞并傳至P4代,并通過(guò)畸胎瘤、堿性磷酸酶染色、SSEA-1和嵌合體實(shí)驗(yàn)對(duì)建立的胚胎干細(xì)胞完成鑒定。
結(jié)論:
本實(shí)驗(yàn)報(bào)道證實(shí)了新生鼠卵巢(卵泡募集前卵巢)切片異體移植聯(lián)合體外成熟培養(yǎng)獲得的成熟卵(MⅡ卵)具有很好的發(fā)育潛能,可
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