胚胎干細胞在內(nèi)膜損傷小鼠宮腔內(nèi)移植的實驗研究.pdf

1、背景：子宮內(nèi)膜損傷是婦產(chǎn)科醫(yī)生臨床上經(jīng)常遇到的問題，其治療策略最重要的一點是促進子宮內(nèi)膜再生和功能恢復(fù)，而對于局部重度或廣泛的內(nèi)膜損傷，目前的治療方法尚難以解決子宮內(nèi)膜重新再生問題，是臨床治療上的棘手問題。隨著近年來干細胞分化理論深入研究，干細胞應(yīng)用于臨床治療的研究也越來越多，這為子宮內(nèi)膜損傷治療提供了一種新的理念，由于胚胎干細胞(Embryonic stemcells，ESC)有很高的再生和分化潛能，胚胎干細胞于其內(nèi)膜損傷內(nèi)移植，為干

2、進一步研究細胞治療子宮內(nèi)膜損傷奠定基礎(chǔ)。
　　 目的：研究小鼠胚胎干細胞移植入內(nèi)膜損傷小鼠宮腔內(nèi)后的存活與遷徙情況。
　　 方法：利用MEF作為飼養(yǎng)層培養(yǎng)EGFP+ES細胞，于ICR小鼠腎被膜下移植，4周后對移植后腫物HE染色及nestin、α-SMA和AFP免疫組化染色觀察；用熱損傷處理子宮內(nèi)膜方法制備ICR小鼠子宮內(nèi)膜損傷模型，并進行一系列的時間觀察損傷后子宮內(nèi)膜情況；急性損傷后移植一定量(3-4×105個)未分化的

3、GFP+小鼠胚胎干細胞至內(nèi)膜損傷小鼠宮腔內(nèi)，14天后取子宮，直接熒光顯微鏡觀察和HE染色后及抗GFP蛋白抗體免疫組化染色后顯微鏡下觀察小鼠胚胎干細胞的存活和遷徙情況。
　　 結(jié)果：ES細胞在成纖維飼養(yǎng)層細胞上生長良好，呈克隆狀生長，熒光顯微鏡下觀察ESC有明顯EGFP表達，發(fā)出綠色熒光，腎被膜下移植后有三個胚層標記表達(nestin、α-SMA和AFP)的畸胎瘤形成；子宮內(nèi)膜熱損傷處理后至14d天HE染色觀察子宮內(nèi)膜沒有修復(fù)表現(xiàn)