地西他濱序貫聯(lián)合去甲氧柔紅霉素通過協(xié)同抑制wnt-α-catenin通路抗急性髓系白血病的體外研究.pdf

1、第一部分：篩選與DAC聯(lián)合效果最佳的藥物和聯(lián)合方式
　　 目的：篩選與DAC聯(lián)合效果最佳的藥物和聯(lián)合方式
　　 方法：將IDA、DNR、ACLA、THAL以及HHT分別與DAC進行同時或序貫聯(lián)合作用于U937細胞株，通過四唑鹽比色試驗(MTT)檢測U937細胞的生長抑制情況，并采用Calcusyn軟件計算其聯(lián)合指數(shù)分析其聯(lián)合效應(yīng)。進一步用基因芯片技術(shù)分析與兩藥協(xié)同效應(yīng)相關(guān)信號通路。
　　 結(jié)果：HHT、THAI、

2、ACLA及DNR與DAC聯(lián)合無協(xié)同抗AML作用，CI指數(shù)都大于0.8；而DAC與IDA序貫聯(lián)合能協(xié)同抑制AML細胞的生長，CI聯(lián)合指數(shù)小于0.8。
　　 結(jié)論：DAC與IDA進行序貫聯(lián)合作用U937細胞株時協(xié)同效果最佳。
　　 第二部份：研究DAC與IDA協(xié)同抗白血病作用的機制
　　 目的：研究DAC與IDA協(xié)同抗白血病作用的機制
　　 方法：用DAC與IDA序貫聯(lián)合作用HEL和SKM-1細胞株，再采用M

3、TT法檢測細胞生長抑制情況，同時用Calcusyn軟件計算其聯(lián)合指數(shù)分析其聯(lián)合效應(yīng)；用流式細胞術(shù)測定DAC與IDA序貫聯(lián)合作用U937、HEL、SKM-1細胞株前后細胞的凋亡情況；用甲基化特異性PCR測定U937、HEL、SKM-1細胞株的Wnt信號通路相關(guān)抑制基因如DKK3、HDPR1、SFRP1甲基化情況；用RT-PCR測定藥物作用前后白血病細胞中Wnt信號通路抑制基因如DKK3、HDPR1、SFRP1和Wnt經(jīng)典通路相關(guān)基因如β-

4、catenin、C-MYC、CyclinD1的mRNA表達變化情況；用WesternBlot法測定藥物作用前后細胞中Wnt信號通路抑制基因如DKK3、HDPR1、SFRP1和WNT經(jīng)典通路相關(guān)基因如β-catenin、C-MYC、CyclinD1蛋白表達變化情況。
　　 結(jié)果：(1)DAC和IDA均能抑制急性髓系白血病細胞株SKM-1和HEL細胞的生長，序貫聯(lián)合時抑制作用優(yōu)于單藥，表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)；(2)DAC和IDA序貫聯(lián)合抑制

5、U937、HEL和SKM-1細胞株生長是通過誘導(dǎo)細胞凋亡實現(xiàn)的，而序貫聯(lián)合作用時凋亡率要優(yōu)于單藥；(3)U937、SKM-1和HEL細胞中Wnt抑制基因(DKK3，HDPR1，SFRP1)都存在不同程度的甲基化；(4)DAC和IDA序貫聯(lián)合可以使U937、SKM-1和HEL細胞中Wnt抑制基因(DKK3，HDPR1，SFRP1)的表達上調(diào)，并且序貫聯(lián)合時作用優(yōu)于單藥；(5)DAC和IDA序貫聯(lián)合可以使U937、SKM-1和HEL細胞中W