去甲基化藥物地西他濱增強細胞毒藥物抗髓系白血病的機制研究.pdf

1、研究背景及目的：急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)是一類起源于造血干細胞遺傳及表觀遺傳學改變的骨髓細胞異?？寺≡鲋承约膊。斐晒撬杓毎脑鲋?、分化及自我更新過程紊亂，原始細胞比例增高，破壞正常造血功能。表觀遺傳學影響染色質結構，并調節(jié)基因表達和保證遺傳信息，這對健康細胞、組織和器官中的關鍵調控基因的正常表達十分重要。表觀遺傳發(fā)生變異將導致基因表達的變化，以DNA甲基化最為常見。目前AM L的標準治療

2、方案仍為蒽環(huán)類藥物聯(lián)合阿糖胞苷(Cytarabine, Ara-C)。已發(fā)現在AML中DNA甲基轉移酶1(DNAmethyltransferase1，DNMT1)表達上調，去甲基化藥物5-氮雜2’-脫氧胞苷，即地西他濱（Decitabine， DAC)是一種去甲基化劑，具有雙重作用機制：低濃度時使沉默失活的抑癌基因激活并促進細胞分化，高濃度時通過抑制DNA合成發(fā)揮細胞毒作用。所以DAC在髓系細胞腫瘤中的作用受到廣泛關注，尤其是DAC聯(lián)合

3、其他化療方案（HA、HAG等)誘導治療復發(fā)、難治性及老年髓系白血病，在臨床上受到重視并獲得較理想的緩解率。本研究旨在比較去甲氧柔紅霉素(Idarubicin， ID A)或高三尖杉酯堿(Homoharringtonine, H H T)聯(lián)合Ara-C2種化療方案對初治AM L(除外急性早幼粒細胞，acute promyelocytic leukemia，A P L)的療效及不良反應，并探討D A C增強細胞毒藥物HHT抗髓系白血病的機制

4、。
　　方法：(1)收集自2012年01年01日至2015年06年30日至本中心就診，并采用減低劑量的ID A或HHT聯(lián)合Ara-C治療的初治AML(APL除外）患者，分析療效其及不良反應；（2)采用M TT比色法研究去甲基化藥物DAC、細胞毒藥物HHT單藥或兩藥序貫聯(lián)合處理后對髓系H L-60細胞株增殖的影響；（3)釆用流式細胞術檢測藥物作用后胞漿P-環(huán)聯(lián)蛋白（P-catenin)的表達及對細胞周期的變化影響；（4)采用West

5、ern b lo t檢測藥物處理H L-60細胞后p-catenin在細胞漿、細胞核中的表達水平；（5)采用細胞免疫熒光技術檢測藥物作用后P-catenin在胞漿、胞核的定位變化;(6)采用qRT-PCR檢測藥物對HL-60細胞中W nt通路相關基因mRNA表達的影響。
　　結果:(1)誘導治療2療程后，低劑量IA方案組67例患者中46例達完全緩解( complete remission, C R), C R率為68.7％，低劑量

6、H A方案組20例患者中8例達CR，C R率為40%，兩組差異有統(tǒng)計學意義（_P=0.02)。兩組患者總有效率（overall response rate, O R R)分別為77.6%和60%,兩組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05)。兩組方案的不良反應主要包括血液學和非血液學兩方面，其中血液學方面主要為骨髓抑制，除中性粒細胞持續(xù)<1x109/L的中位時間差異具統(tǒng)計學意義00.003)外，余均無統(tǒng)計學意義（P>0.05);而兩組非血液學不

7、良反應差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05);(2) DAC、H H T抑制H L-60細胞的增殖；（3) D A C阻止p-catenin由胞漿進入胞核，聯(lián)合HHT后，胞漿、胞核中的P-catenin表達量均明顯減少；（4) DAC、HHT使HL-60細胞阻滯于S期；（5)DAC下調Wnt通路相關基因的轉錄及表達，聯(lián)合HHT后作用增強。
　　結論：（1)對于初治AM L(A P L除外）患者，低劑量IA方案優(yōu)于低劑量H A方案，差異具