2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、【背景】臨床上儲(chǔ)存紅細(xì)胞(RBC)輸入常用于治療貧血或急性失血(如失血性休克),通過增加體內(nèi)血紅蛋白(Hb)含量維持組織和器官氧供。每年全世界收集約8000萬單位RBC,在美國每年約有1500萬單位RBC用于臨床治療,回輸前RBC的平均儲(chǔ)存時(shí)間約為17天。RBC在體外儲(chǔ)存過程中發(fā)生一系列生理生化、形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能變化,稱為“儲(chǔ)存損傷”。此外,RBC回輸是一項(xiàng)經(jīng)驗(yàn)性的治療,在用于臨床之前沒有經(jīng)過嚴(yán)格的前瞻性隨機(jī)對(duì)照研究。越來越多的證據(jù)顯示儲(chǔ)

2、存RBC輸入可能與感染、死亡率增加、多器官功能衰竭、住院時(shí)間延長等不良反應(yīng)相關(guān)。
  儲(chǔ)存RBC輸入后發(fā)生不良反應(yīng)的確切機(jī)制尚不明確。RBC體外儲(chǔ)存過程中隨著儲(chǔ)存時(shí)間延長溶血率增加,而且約有25%RBC在回輸后24小時(shí)內(nèi)被破壞造成血管內(nèi)溶血。研究表明游離Hb與一氧化氮(NO)發(fā)生加氧反應(yīng)的速度較RBC內(nèi)的Hb大大增加,很少量的游離Hb就能極大的降低血管內(nèi)皮中NO的生物利用率。NO是人體生理功能發(fā)揮的重要信號(hào)分子。NO具有調(diào)節(jié)血流、

3、擴(kuò)張血管、增加血管反應(yīng)性、抑制平滑肌細(xì)胞增殖、抑制血小板活化、調(diào)節(jié)血管通透性、介導(dǎo)免疫反應(yīng)、參與神經(jīng)傳遞的重要作用。NO生物利用率下降將導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙、粘附分子表達(dá)、血小板和凝血因子活化及氧自由基(ROS)產(chǎn)生等不良反應(yīng)。RBC能夠通過細(xì)胞內(nèi)的NO合酶(NOS)和去氧Hb的亞硝酸還原作用生成NO。RBC體外儲(chǔ)存之后,NO的生成減少。因此我們推測(cè)儲(chǔ)存RBC回輸?shù)牟涣挤磻?yīng)可能與NO生成減少、破壞增多導(dǎo)致血管內(nèi)NO生物利用率降低有關(guān)。

4、>  內(nèi)皮功能障礙是指由于血管內(nèi)NO含量降低,給予乙酰膽堿后內(nèi)皮依賴性血管擴(kuò)張反應(yīng)降低。通常內(nèi)皮功能障礙與糖尿病和高脂血癥有關(guān)。在db/db小鼠和喂飼高脂飲食的WT小鼠(HFD小鼠)中有明顯的內(nèi)皮功能障礙。本研究通過建立小鼠RBC儲(chǔ)存和輸入模型,將儲(chǔ)存RBC輸入健康和內(nèi)皮功能障礙小鼠中,研究NO生物利用率降低在儲(chǔ)存RBC回輸不良反應(yīng)中的影響及其作用機(jī)制,同時(shí)觀察通過補(bǔ)充外源性的NO對(duì)儲(chǔ)存RBC回輸不良反應(yīng)的預(yù)防和治療作用。
  實(shí)

5、驗(yàn)一小鼠RBC儲(chǔ)存損傷研究
  【目的】研究小鼠RBC體外儲(chǔ)存后儲(chǔ)存損傷程度,建立合適的小鼠RBC儲(chǔ)存系統(tǒng)。
  【方法】將C57BL/6小鼠麻醉后開胸心臟取血。每次約抽取25只小鼠全血進(jìn)行混合,加入14%CPDA-1作為抗凝劑和儲(chǔ)存液。濾除全血中的白細(xì)胞(WBC)后,離心將剩余血液濃縮至血球壓積(Hct)為70-75%,分裝至無菌的離心管中4°C保存。將RBC分成兩組:新鮮RBC組(儲(chǔ)存時(shí)間<24小時(shí),F(xiàn)RBC)和儲(chǔ)存RB

6、C組(儲(chǔ)存時(shí)間為2周,SRBC)。比較兩組RBC的生理生化指標(biāo)差異,觀察儲(chǔ)存后RBC形態(tài)和功能的變化。
  【結(jié)果】1.生化指標(biāo)變化:與FRBC相比,SRBC中pH、PO2、HCO3-顯著下降;PCO2、SBE、BUN和乳酸水平明顯上升,說明RBC經(jīng)體外儲(chǔ)存后發(fā)生代謝性酸中毒;細(xì)胞外Na+顯著降低,同時(shí)K+水平顯著上升,提示隨著儲(chǔ)存時(shí)間延長,RBC細(xì)胞膜上Na-K-ATP酶活性喪失。SRBC溶血率是FRBC溶血率的8倍。與FRBC

7、相比SRBC上清液中游離Hb和metHb的含量明顯升高。2.形態(tài)學(xué)改變:將FRBC和SRBC涂片后染色發(fā)現(xiàn)FRBC中大多數(shù)RBC為正常雙凹圓盤狀結(jié)構(gòu)。RBC儲(chǔ)存兩周后細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變,大多數(shù)為形態(tài)異常的棘紅細(xì)胞、棘球狀紅細(xì)胞、裂口紅細(xì)胞和球形紅細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)的改變提示有細(xì)胞膜喪失,細(xì)胞變形能力降低。3.功能變化:與FRBC相比,SRBC細(xì)胞內(nèi)ATP和2,3-DPG含量明顯降低,Hb氧離曲線(ODC)左移,P50顯著降低,提示RBC對(duì)氧的

8、的親和力增加,不利于外周器官氧的釋放。分別將FRBC和SRBC回輸檢測(cè)RBC回輸后的恢復(fù)率,結(jié)果表明部分SRBC在回輸后24小時(shí)內(nèi)被迅速清除,RBC生存曲線斜率與FRBC相比有顯著差異(P<0.0001)。從24小時(shí)至第8天,F(xiàn)RBC與SRBC的下降的速率沒有顯著差異?;剌?4小時(shí)后,F(xiàn)RBC的恢復(fù)率為99%;SRBC的恢復(fù)率為68%,與FRBC相比31%的SRBC輸入后24小時(shí)被破壞清除,將增加血管內(nèi)溶血和游離Hb含量。與FRBC相比

9、,SRBC上清液中的TXB2含量顯著增加,表明SRBC上清液具有促凝作用。
  【結(jié)論】小鼠SRBC體外儲(chǔ)存2周后發(fā)生顯著的生理生化、形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能改變。表現(xiàn)為pH下降發(fā)生代謝性酸中毒、細(xì)胞內(nèi)外的離子分布失衡、ATP含量下降,伴隨RBC細(xì)胞膜喪失,細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)改變,RBC變形能力降低。2,3-DPG降低,RBC與氧親和力增加,RBC回輸后生存率降低,SRBC上清液中存在大量游離Hb。將各項(xiàng)指標(biāo)與人儲(chǔ)存RBC比較,儲(chǔ)存2周小鼠RBC

10、與儲(chǔ)存6周人RBC儲(chǔ)存損傷程度相似。
  實(shí)驗(yàn)二NO生物利用率對(duì)儲(chǔ)存RBC回輸?shù)挠绊懠皺C(jī)制研究
  【目的】研究儲(chǔ)存RBC回輸對(duì)健康和內(nèi)皮功能障礙HFD和db/db小鼠的影響,探討NO生物利用率在其中的作用和機(jī)制。
  【方法】將36只野生型C57BL/6(WT)小鼠平均分成3組(n=12):對(duì)照組(control)不接受任何輸血或輸液;新鮮RBC輸入組(FRBC)經(jīng)尾靜脈注射占全身血容量10%(相當(dāng)于臨床一個(gè)單位RB

11、C輸入),儲(chǔ)存時(shí)間小于24小時(shí)的新鮮RBC;儲(chǔ)存RBC輸入組(SRBC)經(jīng)尾靜脈輸入占全身血容量10%,儲(chǔ)存時(shí)間為2周的儲(chǔ)存RBC。將24只喂飼4-6周高脂飲食的(HFD)小鼠(n=12)平均分為3組,其分組方式與WT小鼠相同。將90只遺傳背景為C57BL/6的自發(fā)糖尿病(db/db)小鼠隨機(jī)分成9組:對(duì)照組、FRBC組、SRBC組處理方式與WT以及HFD小鼠相同;SRBC+iNO組在輸入SRBC之前10分鐘開始吸入80百萬分率(par

12、tspermillion,ppm)NO,并維持2小時(shí);FRBC和SRBC上清液輸入組經(jīng)尾靜脈分別輸入FRBC或SRBC離心后的上清液;洗滌FRBC和洗滌SRBC組經(jīng)尾靜脈分別輸入洗滌FRBC或SRBC;SRBC上清液氧化組經(jīng)尾靜脈輸入氧化的SRBC上清液。一部分WT和db/db小鼠在經(jīng)過尾靜脈注射后10分鐘處死,取血測(cè)量各種生化指標(biāo)。其余動(dòng)物注射后無創(chuàng)監(jiān)測(cè)血壓2小時(shí)后處死,取血液測(cè)量各項(xiàng)生化指標(biāo)后離心,將獲得的血漿儲(chǔ)存。同時(shí)儲(chǔ)存動(dòng)物的器

13、官留作分析。
  【結(jié)果】由于直接輸入了Hct為70-75%的濃縮RBC,因此將FRBC和SRBC輸入WT、HFD和db/db小鼠均導(dǎo)致Hct和總Hb含量較對(duì)照組增加。與對(duì)照組相比血漿游離Hb含量FRBC和SRBC輸入組均顯著增加。各SRBC輸入組血漿游離Hb與FRBC組相比顯著增加。將SRBC輸入WT小鼠10分鐘后后血乳酸水平顯著增加,說明存在代謝性酸中毒。除此之外,其它生化和血液指標(biāo)在各組間無顯著差異,說明小鼠能耐受小劑量SR

14、BC直接輸入而不發(fā)生明顯的生化改變。輸入FRBC或SRBC對(duì)WT和HFD小鼠收縮壓(SBP)沒有明顯影響。與輸入FRBC相比,將SRBC輸入db/db小鼠后SBP顯著升高。吸入80ppmNO將SRBC輸入引起的高血壓反應(yīng)完全逆轉(zhuǎn),說明將SRBC輸入db/db小鼠引起的高血壓反應(yīng)可能與NO生物利用率降低有關(guān)。為了進(jìn)一步研究究竟是儲(chǔ)存RBC什么成分誘導(dǎo)db/db小鼠發(fā)生高血壓反應(yīng),將SRBC上清液輸入db/db小鼠之后,SBP明顯升高。而將

15、洗滌FRBC或者洗滌SRBC輸入db/db小鼠后不發(fā)生高血壓反應(yīng)。說明是SRBC上清液中某種成分導(dǎo)致高血壓反應(yīng)。此外,將SRBC上清液中游離Hb氧化成高鐵Hb(metHb)之后輸入,完全消除了SRBC上清液輸入引起的高血壓反應(yīng)。因?yàn)閙etHb不與NO發(fā)生加氧反應(yīng),說明輸入SRBC后上清液中的游離Hb通過清除NO,降低NO生物利用率導(dǎo)致db/db小鼠高血壓反應(yīng)。與對(duì)照組和FRBC組相比,各組動(dòng)物輸入SRBC2小時(shí)后血清中鐵含量顯著升高。而

16、肝臟中非血紅素結(jié)合鐵含量各組之間沒有顯著差異。與對(duì)照組和FRBC組相比,輸入SRBC2小時(shí)后,血漿IL-6水平和肝臟中IL-6mRNA表達(dá)明顯升高,全身炎癥反應(yīng)增強(qiáng)。與對(duì)照組和FRBC組相比,輸入SRBC2小時(shí)后,肝臟中HO-1mRNAh和hepcidin表達(dá)水平在WT、HFD和db/db小鼠中均顯著升高。
  【結(jié)論】將儲(chǔ)存RBC輸入后在WT、HFD和db/db小鼠中引起顯著的炎癥反應(yīng)和鐵超載等不良發(fā)應(yīng);SRBC輸入db/db小

17、鼠后引起血管收縮反應(yīng)是由于NO被SRBC上清液中的游離Hb清除、血管內(nèi)NO生物利用率下降所致,補(bǔ)充外源性的NO能消除SRBC輸入引起的高血壓反應(yīng)。
  實(shí)驗(yàn)三NO生物利用率對(duì)儲(chǔ)存RBC復(fù)蘇失血性休克小鼠的影響及其機(jī)制研究
  【目的】研究用儲(chǔ)存RBC對(duì)失血性休克小鼠進(jìn)行復(fù)蘇的效果,探索NO生物利用率降低對(duì)大量輸入儲(chǔ)存RBC的影響和機(jī)制。
  【方法】將60只WT小鼠隨機(jī)分成3組(n=20):對(duì)照組(Control)與其

18、它組動(dòng)物接受相同的手術(shù)操作但不發(fā)生失血性休克;FRBC組動(dòng)物抽血制作失血性休克模型,90分鐘后用FRBC進(jìn)行復(fù)蘇;SRBC組動(dòng)物失血性休克90分鐘之后用SRBC進(jìn)行復(fù)蘇。將80只HFD小鼠隨機(jī)分成4組(n=20):對(duì)照組、FRBC組和SRBC組的設(shè)定同WT小鼠;SRBC+iNO組動(dòng)物在SRBC復(fù)蘇之前10分鐘吸入80ppmNO并持續(xù)2小時(shí)。每組10只動(dòng)物用作生存率觀察,其余動(dòng)物在復(fù)蘇后2小時(shí)處死,取血樣和器官留作后續(xù)分析。
  【

19、結(jié)果】HFD小鼠血壓的基礎(chǔ)值顯著高于WT小鼠(P<0.001)。復(fù)蘇后各組之間MAP沒有明顯差異。通過Kaplan-Meier生存曲線比較,F(xiàn)RBC或SRBC復(fù)蘇對(duì)WT小鼠短期生存率(12小時(shí))和長期生存率(7天)均沒有顯著差異(P=NS)。與WT小鼠相比,SRBC復(fù)蘇的HFD小鼠長期生存率顯著降低(0%比40%,P<0.05)。HFD小鼠中,SRBC復(fù)蘇小鼠的短期生存率和長期生存率與FRBC組相比顯著降低。吸入80ppmNO明顯增加S

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