胰淀素對人肝細胞L-02葡萄糖-6-磷酸酶基因表達的影響.pdf

1、目的： 葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase，G-6-Pase)是糖代謝過程中一個重要的酶，由于它是糖異生和糖原分解的最后一步反應(yīng)的限速酶，因此其基因表達水平的變化可影響到內(nèi)生性糖的輸出。事實上，2型糖尿病的高血糖同肝臟胰島素抵抗所致肝糖過度輸出有關(guān)。胰淀素作為胰島β細胞重要的活性激素，參與血糖調(diào)節(jié)。目前研究表明，其異常分泌參與了胰島素抵抗。本實驗旨在研究胰淀素對該酶基因表達的影響，從而進一步探討胰淀素

2、與肝糖輸出及與胰島素抵抗的相關(guān)性。 方法： 1.引進人肝細胞系L-02，參照文獻進行體外培養(yǎng)。 2.在不同濃度的血糖、胰島素及不同濃度胰淀素的培養(yǎng)基下培養(yǎng)肝細胞，然后提取細胞總RNA，應(yīng)用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(SQ-RT-PCR)法，檢測G-6-Pase的表達水平。 結(jié)果： 1.經(jīng)相差顯微鏡觀察人肝細胞生長良好。 2.人肝細胞在高糖(15mM)高胰島素(100IU/L)培養(yǎng)液中培養(yǎng)24

3、小時后，G-6-PasemRNA豐度比對照組(低糖低胰島素組)增高，具有統(tǒng)計學意義。 3.加入不同濃度的胰淀素與高糖高胰島素聯(lián)合培養(yǎng)2小時后，0.1μM、1μM胰淀素組G-6-PasemRNA水平無明顯變化，10μM胰淀素會使G-6-PasemRNA豐度較高糖高胰島素組明顯增高，具有統(tǒng)計學意義。 結(jié)論： 1.人肝細胞L-02體外培養(yǎng)良好。 2.在高糖高胰島素的培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時后，與對照組(低糖低胰島素組

4、)相比，G-6-Pase的表達水平增高，提示了高濃度葡萄糖降低了胰島素對G-6-PasemRNA的抑制作用；加入不同濃度的胰淀素后，與高糖高胰島素組相比，0.1μM、1gM胰淀素組G-6-PasemRNA水平無明顯變化；10μM的胰淀素會使G-6-PasemRNA的表達水平明顯增高，(P<0.01)，顯示高濃度胰淀素、高濃度葡萄糖條件使胰島素對G-6-PasemRNA的抑制作用進一步降低。提示糖尿病患者異常分泌的胰淀素干擾了肝糖輸出，參