氯化鋰及綠原酸對(duì)大鼠肝細(xì)胞葡萄糖6磷酸酶基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：肝臟葡萄糖-6-磷酸酶是控制機(jī)體葡萄糖穩(wěn)態(tài)的一個(gè)重要的酶，由于它是催化機(jī)體葡萄糖合成的最后一步生化反應(yīng)，如水解6-磷酸葡萄糖為葡萄糖和磷酸。事實(shí)上，2型糖尿病的高血糖同肝臟胰島素抵抗所致的肝糖過(guò)度輸出有著緊密相關(guān)。因此葡萄糖-6-磷酸酶是糖尿病治療的一個(gè)潛在的靶點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)旨在研究該酶的幾種抑制劑對(duì)該酶的基因表達(dá)的影響作用，為進(jìn)一步探討利用該酶的抑制劑作為糖尿病的治療手段提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法：以膠原酶原位灌注消化的

2、方法分離制備大鼠肝細(xì)胞，用含10％FBS及牛胰島素的1640培養(yǎng)液進(jìn)行原代培養(yǎng)．細(xì)胞貼壁后，換用新鮮的含不同濃度的葡萄糖和葡萄糖-6-磷酸酶的不同抑制劑而不含血清和胰島素的培養(yǎng)液培養(yǎng)4小時(shí)。然后提取細(xì)胞總RNA，采用半定量RT-PCR的方法測(cè)定P36和P46的mRNA的豐度。 結(jié)果： 1．采用以膠原酶原位灌注消化的方法分離制備的肝細(xì)胞產(chǎn)率及活率均很高。細(xì)胞的活率可達(dá)到95％以上。 2．大鼠肝細(xì)胞在高糖培養(yǎng)液（25

3、mMGLu）中培養(yǎng)4小時(shí)后，其催化亞基和轉(zhuǎn)運(yùn)亞基mRNA均明顯增加。（P<0．05） 3．采用轉(zhuǎn)運(yùn)亞基特異的抑制劑氯原酸（5mM）與高糖培養(yǎng)液聯(lián)合培養(yǎng)肝細(xì)胞4小時(shí)后，肝細(xì)胞葡萄糖-6-磷酸酶的催化亞基和轉(zhuǎn)運(yùn)亞基的mRNA的豐度均下降。（P<0．05） 4．利用糖原合成酶激酶3抑制劑氯化鋰（10mM、20mM）培養(yǎng)肝細(xì)胞也可達(dá)到同樣的抑制效果。 結(jié)論：利用膠原酶消化制備的肝細(xì)胞具有較好的產(chǎn)率和活率。體外高糖培養(yǎng)細(xì)胞