c-Abl激酶在β2整合素介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的作用研究.pdf

1、白細胞沿著血管內(nèi)皮滾動、穩(wěn)定粘附和跨內(nèi)皮遷移，最終到達炎癥部位是一個復(fù)雜的多步驟的過程，它的精確調(diào)控與機體的宿主防御和炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。有多種粘附分子參與這一事件，其中β2整合素主要介導(dǎo)白細胞穩(wěn)定粘附于血管內(nèi)皮上和跨內(nèi)皮的遷移。β2整合素是一類僅表達于白細胞表面的粘附分子家族，它包括四個成員，由一個共同的β亞基分別與四種α亞基形成非共價結(jié)合的異源二聚體。在靜息的白細胞中，β2整合素以一種低親和力和非粘附的狀態(tài)存在。在炎癥部位產(chǎn)生的細胞因

2、子和趨化因子的刺激下，β2整合素能夠迅速活化與其配體結(jié)合，這個過程為整合素的“inside—out”信號?；罨恼纤啬墚a(chǎn)生“outside—in”信號來調(diào)節(jié)細胞的骨架變化以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。β2整合素的信號對于中性粒細胞的穩(wěn)定粘附和伸展非常關(guān)鍵，大量證據(jù)表明中性粒細胞的呼吸爆發(fā)、脫顆粒、蛋白的酪氨酸磷酸化等生理事件都依賴于β2整合素介導(dǎo)的細胞粘附。但是，對于中性粒細胞中β2整合素是如何調(diào)控細胞粘附的機制還不十分清楚。在中性粒細胞中，粘附引起

3、的β2整合素的交聯(lián)能夠活化多種非受體酪氨酸激酶，這些激酶與細胞的骨架重排、生長、存活、運動密切相關(guān)。c—Abl激酶是一種非受體酪氨酸激酶，它參與多種受體引起的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，并且參與了F—肌動蛋白依賴的細胞骨架變化。我們推測，c—Abl激酶可能參與了β2整合素介導(dǎo)的中性粒細胞粘附。本文主要探討了c—Abl激酶在中性粒細胞的β2整合素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的功能和作用機制。 我們的研究發(fā)現(xiàn)，在中性粒細胞中，β2整合素的交聯(lián)能夠增強c—Abl激酶的活

4、性。細胞因子TNF—α能夠引起細胞表面整合素表達的增加和活性的增強，但是c—Abl激酶抑制劑STI571并不影響這一變化，表明c—Abl激酶不參與TNF—α引起的整合素inside—out活化。而c—Abl激酶的抑制能顯著降低細胞的穩(wěn)定粘附和伸展，當干涉胞內(nèi)的c—Abl激酶表達后也有相似的作用，因此c—Abl激酶主要參與了β2整合素的outside—in信號通路。 在靜息的中性粒細胞中，c—Abl激酶均勻的分布在細胞質(zhì)內(nèi)，而β2

5、整合素介導(dǎo)細胞粘附之后，c—Abl激酶就募集到β2整合素富集的部位。通過蛋白質(zhì)免疫沉淀和GSTpull—down等實驗，我們發(fā)現(xiàn)在β2整合素交聯(lián)的中性粒細胞中，β2整合素與c—Abl激酶存在于同一個蛋白質(zhì)復(fù)合體中，但二者的結(jié)合不是直接的。talin是一類骨架蛋白，它的頭部與中性粒細胞中的β2整合素的胞漿尾部直接并持續(xù)地結(jié)合。活化的c—Abl激酶通過其SH3結(jié)構(gòu)域與talin的頭部結(jié)合，進而募集到β2整合素的胞漿尾部。 Vav是

6、一類鳥苷酸交換因子，它參與了β2整合素對中性粒細胞粘附的調(diào)控。我們的實驗發(fā)現(xiàn)，在中性粒細胞中c—Abl激酶與Vav持續(xù)結(jié)合，并且在β2整合素產(chǎn)生的信號通路中c—Abl激酶能夠調(diào)節(jié)Vav的活性。二者的作用方式是通過c—Abl激酶的SH3結(jié)構(gòu)域與Vav的SH2結(jié)構(gòu)域的結(jié)合。通過點突變實驗，我們發(fā)現(xiàn)c—Abl激酶SH3結(jié)構(gòu)域中的134位酪氨酸對于二者的結(jié)合很關(guān)鍵。 我們的結(jié)果證明了，在β2整合素介導(dǎo)的中性粒細胞粘附過程中，c—Abl激