c-Abl激酶在整合素αvβ3介導(dǎo)的黑色素瘤細(xì)胞黏著和遷移中作用及機(jī)制研究.pdf

1、腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移是癌癥高致死率的主要原因，而細(xì)胞浸潤和轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)是細(xì)胞遷移。整合素作為細(xì)胞膜上的黏附分子，一方面通過胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域與胞內(nèi)的細(xì)胞骨架結(jié)合在一起，另一方面通過胞外的球狀結(jié)構(gòu)域與細(xì)胞外基質(zhì)連接在一起，從而使細(xì)胞錨定在細(xì)胞外基質(zhì)上。另外整合素還能夠整合細(xì)胞內(nèi)外的信號從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的遷移，所以整合素對于細(xì)胞的遷移是非常關(guān)鍵的。αvβ3整合素在許多腫瘤細(xì)胞都有高表達(dá)，包括乳腺癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞。αvβ3

2、整合素在腫瘤細(xì)胞的高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，尤其是腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。
　　整合素介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的黏附和遷移主要是通過與細(xì)胞骨架聯(lián)系形成黏著斑，并通過黏著斑的組裝與去組裝的動態(tài)時空變化來實(shí)現(xiàn)的。整合素本身沒有酶活性，其作用一般由一些相關(guān)的激酶來調(diào)節(jié)。c-Abl激酶作為細(xì)胞內(nèi)的非受體酪氨酸激酶能夠使許多蛋白分子磷酸化，激活相應(yīng)的靶分子、調(diào)控細(xì)胞骨架的重組或基因的表達(dá)，從而參與細(xì)胞的凋亡、分化、衰老等多種生理過程，有研究報道

3、認(rèn)為它參與了細(xì)胞的遷移過程。
　　在本論文中，通過transwell、單層細(xì)胞劃痕等遷移實(shí)驗?zāi)Ｐ桶l(fā)現(xiàn)c-Abl激酶參與了PDGF誘導(dǎo)的αvβ3整合素介導(dǎo)的黑色素瘤A375細(xì)胞的遷移。并且通過免疫熒光雙標(biāo)記實(shí)驗證實(shí)了二者存在共定位的現(xiàn)象。免疫共沉淀的實(shí)驗結(jié)果表明c-Abl激酶與αvβ3整合素存在于同一個蛋白復(fù)合體中。通過體外激酶反應(yīng)等實(shí)驗發(fā)現(xiàn)c-Abl激酶與αvβ3整合素的相互作用依賴于c-Abl激酶活性的變化;同時c-Abl激酶對

4、αvβ3整合素的調(diào)控不受F-肌動蛋白的影響，c-Abl激酶也沒有參與αvβ3整合素與胞外配體結(jié)合引發(fā)的整合素outside-in的信號通路。
　　利用構(gòu)建的c-Abl激酶幾個不同的與其它蛋白相互作用關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域的GST融合蛋白的體外表達(dá)體系，通過GST-pull down實(shí)驗證明了c-Abl激酶是通過它的SH3結(jié)構(gòu)域與αvβ3整合素形成復(fù)合體的。還進(jìn)一步證實(shí)c-Abl激酶是通過與talin蛋白直接連接來調(diào)控αvβ3整合素在細(xì)胞遷移中