天麻素和黃芩素作為佐劑對抗原提呈細胞及黑色素瘤小鼠CTL的作用研究.pdf

1、目的：腫瘤一直威脅著人類健康，由于其發(fā)病率和致死率較高，因此加深對腫瘤的發(fā)生機制和免疫學的研究有利于開發(fā)出有效的治療手段。通過注射疫苗來提高機體免疫力是預防疾病的手段之一，但傳統(tǒng)疫苗免疫原性弱，相對較難引起免疫反應。天麻和黃芩是兩種中藥材，其有效成分天麻素和黃芩素有多種藥理作用，并且在《本草綱目》中有天麻素無毒的記載。但其是否可以作為免疫佐劑來增強免疫原性還未見報道，所以，我們主要通過天麻素的體內和體外實驗來研究天麻素是否具有增強免疫原

2、性的作用；并將黃芩素作為佐劑來評價黃芩素對抗原提呈細胞的免疫增強作用。從實驗室的角度為促進臨床腫瘤免疫治療的發(fā)展和進步提供一條可行的思路。
　　方法：在體外，檢測天麻素和黃芩素素對DC2.4和RAW264.7細胞的刺激活性，在體內，檢測天麻素和黃芩素對抗原提呈細胞的免疫增強活性，并建立小鼠黑色素瘤模型，檢測天麻素作為佐劑對荷瘤小鼠CTL的作用。在體外實驗中，我們將LPS作為陽性對照，不同濃度的天麻素和黃芩素分別刺激DC2.4細胞系

3、和RAW264.7細胞系，培養(yǎng)48h后用抗體進行染色，用流式細胞儀檢測兩種細胞表面蛋白CD80，CD86，MHC I和MHC II的表達量變化；在體內實驗中，我們分別做了天麻素作為佐劑對黑色素瘤小鼠CTL的作用研究和黃芩素作為佐劑對抗原提呈細胞的作用研究，在天麻素作為佐劑的研究中，我們將C57BL/6小鼠分為6組，每組10只，以弗式完全佐劑與滅活的B16F10腫瘤細胞作為陽性對照，以滅活的B16F10腫瘤細胞為陰性對照，以天麻素與滅活的

4、腫瘤細胞作為實驗組對 C57BL/6小鼠進行免疫，免疫3d后對其天然免疫效果進行評價，并建立小鼠黑色素瘤模型，對T細胞的殺傷功能進行評價，最后，綜合小鼠的腫瘤大小及存活率來評價天麻素作為佐劑的效果；在黃芩素作為佐劑的研究中，我們將C57BL/6小鼠分為8組，每組10只，以黃芩素與滅活的腫瘤細胞作為實驗組對 C57BL/6小鼠進行免疫，免疫3d后對小鼠脾臟細胞中的抗原提呈細胞表面蛋白及分泌的細胞因子進行檢測，綜合體外結果，評價黃芩素對抗原

5、提呈細胞的激活作用。
　　結果：體外流式檢測結果顯示，天麻素和黃芩素有較強的抗原提呈細胞激活作用；體內結果顯示，天麻素和黃芩素對抗原提呈細胞表面標志物和胞內細胞因子的表達有增強作用，并且天麻素能激活CD4+T細胞，并使其高表達細胞因子IL-2和 IFN-γ，激活CD8+T細胞，使其高表達細胞因子perforin，TNF-a和IFN-γ。
　　結論：天麻素能夠提高T細胞介導的免疫應答，并顯著提高了荷瘤小鼠的存活時間；天麻素因其