Notch1-Jagged1(CD339)在腎移植受者外周血淋巴細(xì)胞及移植腎組織中的表達(dá).pdf

1、目的和意義： 腎臟移植是臨床上治療終末期腎臟疾病的有效手段，但移植排斥反應(yīng)仍是目前移植領(lǐng)域難以克服的重要問題，在同種異體腎移植中，急性排斥反應(yīng)（Acute rejection，AR）是術(shù)后最常見的并發(fā)癥，它通常發(fā)生于術(shù)后3個(gè)月內(nèi)，最常見于術(shù)后1～3周，術(shù)后幾年亦有發(fā)生。AR如果能得到早期診斷并正確治療的話，90%以上患者的排斥反應(yīng)可被逆轉(zhuǎn)。AR是慢性排斥反應(yīng)（Chronic rejection，CR）發(fā)生的高危因素，也是導(dǎo)致移植

2、物長期存活失敗和移植腎失去功能的最重要危險(xiǎn)因素之一。急性排斥反應(yīng)和急性腎小管壞死（Acute tubular necrosis，ATN）都是腎移植術(shù)后常見并發(fā)癥，兩者術(shù)后都是以少尿、無尿?yàn)橹饕攸c(diǎn)，術(shù)后早期較難鑒別。因此，如何早期診斷急性排斥反應(yīng)非常重要。移植腎穿刺活檢病理進(jìn)行分型診斷是了解移植腎狀態(tài)的經(jīng)典指標(biāo)，但其有創(chuàng)性及反復(fù)動(dòng)態(tài)監(jiān)測的困難性限制了它的臨床應(yīng)用。血肌酐升高作為排斥指標(biāo)既不夠敏感，又缺乏特異性。因此，探索非侵入性急性排斥

3、反應(yīng)診斷方法一直是腎移植臨床研究的熱點(diǎn)之一。 Notch信號(hào)通路是一個(gè)古老的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，Notch信號(hào)是一組跨膜受體，Notch信號(hào)通路由Notch受體、Notch配體和CSL-DNA結(jié)合蛋白、其它的效應(yīng)物、Notch的調(diào)節(jié)分子等組成。Notch受體最早發(fā)現(xiàn)于果蠅，因該基因的部分功能缺失會(huì)在果蠅翅膀邊緣造成一些缺刻（Notchs）而命名。哺乳動(dòng)物中共發(fā)現(xiàn)4類Notch基因，編碼4種Notch受體，分別為Notch1～4。Not

4、ch的配體在哺乳動(dòng)物中Notch配體共有5種，分別為Delta-like1、3、4和Jagged1、2，Notch的配體與其受體一樣均為跨膜蛋白。Jagged1（新近被命名為CD339）是存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞膜上Notch受體的主要配體之一，為單次跨膜糖蛋白，表達(dá)于骨髓、胎兒肝基質(zhì)細(xì)胞和胸腺上皮細(xì)胞等多種組織，參與調(diào)控許多組織的生長發(fā)育。 最近的許多研究提示，Notch信號(hào)在外周免疫系統(tǒng)的分化和調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用。移植腎排斥反應(yīng)發(fā)生時(shí)

5、，移植物作為同種異體抗原刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，引起Notch受體表達(dá)上調(diào)。Notch信號(hào)通路又通過一系列途徑促進(jìn)淋巴細(xì)胞分化、增殖?；罨牧馨图?xì)胞分泌細(xì)胞因子，進(jìn)一步促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖并產(chǎn)生免疫效應(yīng)。研究表明，Notch信號(hào)可以通過調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞表面CD25的表達(dá)以及增強(qiáng)NF-kappaB的活性，促進(jìn)IFNγ的分泌等途徑來促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖。Notch信號(hào)通路活化在細(xì)胞因子或CD分子分泌表達(dá)之前，因此與其他的檢測指標(biāo)相比，Notch1受體表達(dá)水

6、平的檢測可能更有助于急性排斥反應(yīng)的早期診斷。 本課題擬采用流式細(xì)胞術(shù)檢測Notch1/Jagged1在腎移植術(shù)后受者外周血淋巴細(xì)胞中的表達(dá)，并應(yīng)用免疫組化SP法檢測各組移植腎組織中的Notch1/Jagged1蛋白表達(dá)，探討檢測外周血淋巴細(xì)胞中Notch1/Jagged1的有效性及實(shí)用性，并就Notch1/Jagged1在急性排斥反應(yīng)的診斷及鑒別診斷中是否有意義以及對(duì)急性排斥的治療是否具有指導(dǎo)價(jià)值等方面展開一些探討和研究。

7、 方法： 1、選取2007年1月～2008年12月接受腎移植手術(shù)的患者，以術(shù)后早期（1個(gè)月內(nèi)）發(fā)生急性排斥反應(yīng)（AR）的患者15例為急性排斥組，同期術(shù)后急性腎小管壞死（ATN）6例為腎小管壞死組，同期術(shù)后順利恢復(fù)、腎功能穩(wěn)定的15例為腎功能穩(wěn)定組。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測所有患者術(shù)前和手術(shù)后1d、3d、7d、14d以及急性排斥組和腎小管壞死組發(fā)?。òl(fā)生排斥或腎小管壞死）時(shí)及相應(yīng)治療（抗排斥或血液透析等）后1d、3d、7d、14d的N

8、otch1/Jagged1的淋巴細(xì)胞陽性表達(dá)率，對(duì)比各組手術(shù)前后、發(fā)病前后以及AR患者抗排斥治療前后不同時(shí)間點(diǎn)間的Notch1/Jagged1表達(dá)差異。 2、選取2007年1月～2008年12月收治的晚期急性排斥反應(yīng)（>1年）患者8例為急性排斥組，診斷為慢性移植腎腎?。–AN）的15例患者為慢性移植腎病組，同期本院就診行定期常規(guī)復(fù)查的腎移植術(shù)后腎功能正常穩(wěn)定的10例患者作為腎功能正常組。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測患者外周血淋巴細(xì)胞的No

9、tch1/Jagged1表達(dá)，對(duì)比三組外周血的Notch1/Jagged1表達(dá)差異，再按不同的免疫抑制方案和慢性移植腎病者是否行血液透析分別進(jìn)行分組對(duì)比，了解Notch1/Jagged1表達(dá)與免疫抑制方案及血液透析的關(guān)系。 3、2007年1月～2008年12月采集的腎組織標(biāo)本分為以下三組：（1）、急性排斥組：15例，均為腎移植術(shù)后發(fā)生急性排斥反應(yīng)時(shí)行移植腎穿刺獲取的患者移植腎組織；（2）、慢性移植腎腎?。–AN）組：15例，均為

10、腎移植術(shù)后發(fā)生慢性移植腎腎病患者的移植腎組織；（3）、正常對(duì)照組：10例，為正常腎組織，其中6例為外傷后行腎切除者，4例為腎癌根治術(shù)癌旁5cm以外正常組織石蠟標(biāo)本。所有腎臟組織標(biāo)本采用免疫組化SP法檢測組織中Notch1/Jagged1蛋白表達(dá)，對(duì)比各組Notch1/Jagged1的表達(dá)差異，并將急性排斥組和慢性移植腎病組按病理結(jié)果進(jìn)行分級(jí)，對(duì)比不同病理分級(jí)間的Notch1/Jagged1表達(dá)差異，了解Notch1/Jagged1表達(dá)與

11、病理分級(jí)之間的關(guān)系。 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS13．0軟件包建立數(shù)據(jù)庫，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，以P<0．05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)后早期各組多時(shí)間點(diǎn)間的比較采用重復(fù)測量的方差分析，每個(gè)分組在不同時(shí)間點(diǎn)上的兩兩比較采用Bonferron法，同一時(shí)間點(diǎn)上不同分組之間的兩兩比較采用LSD法。術(shù)后晚期及移植腎組織兩組之間的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，急性排斥組抗排斥治療前后的比較采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，多組之間的比較采用

12、單因素方差分析（One-way ANOVA），組間兩兩比較采用LSD法。Notch1與Jagged1表達(dá)的相關(guān)性用Pearson相關(guān)分析，Notch1/Jagged1表達(dá)與病理分級(jí)的相關(guān)性用spearman相關(guān)分析。 結(jié)論： 1、腎移植術(shù)后早期急性排斥反應(yīng)發(fā)生時(shí)外周血淋巴細(xì)胞表面Notch1/Jagged1表達(dá)水平顯著增高，檢測外周血淋巴細(xì)胞的Notch1/Jagged1表達(dá)水平有助于急性排斥反應(yīng)的診斷。 2、急

13、性排斥反應(yīng)經(jīng)抗排斥治療后，Notch1/Jagged1表達(dá)水平顯著下降，因此，測定外周血淋巴細(xì)胞的Notch1/Jagged1表達(dá)水平有助于急性排斥反應(yīng)治療效果的動(dòng)態(tài)監(jiān)測。 3、腎移植手術(shù)后ld時(shí)各組受者外周血Notch1/Jagged1表達(dá)水平均有升高，早期ATN患者外周血淋巴細(xì)胞的Notch1/Jagged1表達(dá)與腎功能穩(wěn)定患者無顯著性差異，但明顯低于急性排斥反應(yīng)患者，對(duì)鑒別ATN和AR有一定幫助。 4、檢測腎移植晚

14、期受者外周血淋巴細(xì)胞的Notch1/Jagged1表達(dá)不能用于CAN的診斷，但仍有助于腎移植晚期受者急、慢性排斥反應(yīng)的鑒別以及監(jiān)測抗排斥治療的效果。 5、CAN患者外周血淋巴細(xì)胞表面Notch1/Jagged1表達(dá)水平與免疫抑制方案及是否行血液透析無關(guān)。 6、急性排斥反應(yīng)腎組織Notch1/Jagged1蛋白表達(dá)明顯高于正常腎組織和慢性移植腎腎病腎組織，提示移植腎組織Notch1/Jagged1蛋白表達(dá)可作為監(jiān)測移植腎形