SPIO-PLL及Brdu標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞移植入局灶性腦缺血大鼠腦紋狀體的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的： 探討超順磁性氧化鐵顆粒(SPIO)標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞以及Brdu標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞移植入缺血模型大鼠腦內(nèi)，用MRI動(dòng)態(tài)示蹤移植的神經(jīng)干細(xì)胞，用免疫熒光來(lái)檢測(cè)離體的神經(jīng)干細(xì)胞的遷移、增殖、分化的方法，并將活體和腦片的結(jié)果加以對(duì)照，總結(jié)兩者之間的聯(lián)系。為腦缺血神經(jīng)干細(xì)胞移植的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。 研究方法： 制作大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞模型。多聚左旋賴氨酸介導(dǎo)的SPIO標(biāo)記胎鼠神經(jīng)干細(xì)胞，進(jìn)行臺(tái)盼蘭染色和普魯士蘭染

2、色分別檢測(cè)標(biāo)記細(xì)胞的存活率和標(biāo)記率。SPIO標(biāo)記胎鼠神經(jīng)干細(xì)胞移植分為3組：正常鼠左側(cè)紋狀體移植Fe<,2>O<,3>-PLL標(biāo)記NSC對(duì)照組、腦缺血缺血對(duì)側(cè)移植滅活Fe<,2>O<,3>-PLL標(biāo)記NSC對(duì)照組、腦缺血組缺血對(duì)側(cè)移植Fe<,2>O<,3>-PLL標(biāo)記NSC實(shí)驗(yàn)組共三組，于3d、7d、2周、4周、6周腹腔麻醉后各掃描一次。6周后處死大鼠，行組織切片普魯士蘭染色。Brdu標(biāo)記胎鼠神經(jīng)干細(xì)胞移植分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組兩個(gè)組：實(shí)驗(yàn)

3、組，即缺血側(cè)移植Brdu標(biāo)記NSC組，對(duì)照組為正常鼠右側(cè)紋狀體移植Brdu標(biāo)記NSC組，各組又分為3d、7d、2周、4周、6周時(shí)間點(diǎn)，在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)處死大鼠，分別行BrdU/Nestin、BrdU/MAP-2、BrdU/GFAP雙標(biāo)細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)。體外標(biāo)記的神經(jīng)干細(xì)胞普魯士蘭染色發(fā)現(xiàn)鐵顆粒聚集于細(xì)胞漿內(nèi)，標(biāo)記率為98﹪：標(biāo)記細(xì)胞與未標(biāo)記細(xì)胞的臺(tái)盼蘭染色結(jié)果無(wú)顯著差異。移植后MRI掃描，第3天各組注射點(diǎn)T2WI序列均可見類圓形低信號(hào)影；1

4、周時(shí)正常鼠左側(cè)紋狀體移植Fe<,2>O<,3>-PLL標(biāo)記NSC、缺血對(duì)側(cè)移植Fe<,2>O<,3>-PLL標(biāo)記NSC組，兩組大鼠注射后注射點(diǎn)可見低信號(hào)影，腦缺血對(duì)側(cè)移植滅活Fe<,2>O<,3>-PLL標(biāo)記的NSC組低信號(hào)影已不明顯；4周后正常鼠左側(cè)紋狀體移植Fe<,2>O<,3>-PLL標(biāo)記NSC組，低信號(hào)影變淡且邊緣變模糊，6周后低信號(hào)影T2WI已不明顯；而缺血對(duì)側(cè)移植Fe<,2>O<,3>-PLL標(biāo)記NSC組仍可見低信號(hào)影，且向

5、缺血側(cè)遷移約1.5mm。6周后腦組織切片的普魯士蘭染色顯示，缺血對(duì)側(cè)移植滅活Fe<,2>O<,3>-PLL標(biāo)記的NSC組大鼠腦組織切片未見異常藍(lán)染細(xì)胞，缺血對(duì)側(cè)移植Fe<,2>O<,3>-PLL標(biāo)記NSC組，大鼠注射后注射點(diǎn)可見藍(lán)染細(xì)胞，位置與磁共振上低信號(hào)影位置相吻合；正常鼠左側(cè)紋狀體移植Fe<,2>O<,3>-PLL標(biāo)記NSC組，注射點(diǎn)未見藍(lán)色顆粒狀物質(zhì)。Brdu標(biāo)記NSC移植后第3天、第7天對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，大鼠免疫熒光均見針道附近

6、大量的BrdU/Nestin陽(yáng)性細(xì)胞，2周后實(shí)驗(yàn)組的BrdU/MAP-2陽(yáng)性細(xì)胞明顯增多，對(duì)照組見BrdU/MAP-2陽(yáng)性細(xì)胞較少，可見部分BrdU單標(biāo)細(xì)胞。四周后實(shí)驗(yàn)組可看到針道附近BrdU/MAP-2及BrdU/GFAP陽(yáng)性細(xì)胞陽(yáng)性細(xì)胞向針道四周向外延伸。六周后缺血組腦片免疫熒光見大量BrdU陽(yáng)性細(xì)胞，其中12﹪BrdU陽(yáng)性細(xì)胞同時(shí)顯示MAP-2陽(yáng)性細(xì)胞。 研究結(jié)論； 多聚左旋賴氨酸介導(dǎo)下SPIO可用于標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞