擬穴青蟹蛻殼與微生物組動態(tài)變化關系的初步研究.pdf

1、擬穴青蟹是我國東南沿海重要的養(yǎng)殖經濟動物，蛻殼是青蟹個體生長發(fā)育過程中普遍存在的重要現象，是青蟹個體不連續(xù)性增長的重要標志。研究發(fā)現，在青蟹蛻殼過程中，其體內的微生物數量、群落結構及相關的生理生化往往都會發(fā)生動態(tài)變化，揭示了微生物組在青蟹蛻殼后期重建的過程，為后人進一步的研究提供寶貴數據、奠定研究基礎。
　　本研究在“蟹公寓”開展養(yǎng)殖實驗，獲得蛻殼后的青蟹。并對青蟹蛻殼前(重殼蟹)、蛻殼0天(即蛻殼后6h內取樣)、蛻殼后3天、6天

2、及15天的腸道、殼內皮、鰓組織樣品及養(yǎng)殖水體、飼喂餌料進行取樣。對樣品中的微生物進行了熒光顯微計數及高通量測序并對數據進行了研究分析。主要結果如下：
　　1、使用熒光染料SYBR Green I對青蟹腸道、殼內皮、鰓組織樣品及養(yǎng)殖水體、飼喂餌料進行熒光顯微計數。發(fā)現腸道、殼內皮、鰓組織微生物數量在蛻殼前后均發(fā)生顯著減少(P<0.05)；在蛻殼后0-15天的養(yǎng)殖過程中，青蟹微生物含量呈現逐漸升高趨勢；測得養(yǎng)殖水體微生物含量約為(4.

3、03±0.45)×105～(4.94±0.36)×105個/ml，餌料中微生物含量約為(5.47±0.68)×107～(8.40±0.72)×107個/g。
　　2、對高通量16S rRNA序列分析發(fā)現：青蟹各組織、養(yǎng)殖水體及餌料的共有優(yōu)勢菌主要為變形菌門(Proteobacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)和放線菌門(Actinobacteria)，其中變形菌門中的鹽單胞菌屬(Halomonas)占絕對優(yōu)勢，與

4、青蟹適應水體鹽度環(huán)境密切相關。餌料與青蟹各組織共有優(yōu)勢菌主要為梭菌門(Fusobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)；水體特有優(yōu)勢菌主要為藍藻菌門(Cyanobacteria)。
　　對不同蛻殼時期青蟹組織樣品的微生物進行分析發(fā)現：青蟹體內有些常駐菌是定植于該組織的核心菌群，但其相對豐度會隨不同蛻殼周期而發(fā)生變化。此類常駐菌在腸道樣品中有39個屬、殼內皮組織中有46個屬、鰓組織中有74個屬。
　　3、青蟹各組織

5、微生物組成及結構在蛻殼前后會發(fā)生較為明顯的變化。
　　腸道組織中，優(yōu)勢菌如鹽單胞菌、Candidatus Hepatincola、弧菌(Vibrios)、弓形桿菌(Arcobacter)等在蛻殼后(0天)比蛻殼前相對豐度均升高，而在蛻殼后0-15天呈降低趨勢。殼內皮組織中，鹽單胞菌及涅斯捷連科氏菌(Nesterenkonia)蛻殼后相對豐度增加并在蛻殼后0-15天也為上升趨勢，而弧菌、黃質菌(Flavobacterium)、黃桿菌

6、(Tenacibaculum)、假交替單胞菌(Pseudoalteromonas)及Leadbetterella等在蛻殼后一直呈下降趨勢。鰓組織中，Albimonas、Leadbetterella、黃桿菌、假交替單胞菌、弧菌等在蛻殼后的相對豐度均因舊鰓的蛻去而下降至較低水平。Albimonas、Leadbetterella的相對豐度在蛻殼0-6天上升至較高水平后下降，而假單胞菌、弧菌等在蛻殼后3天相對豐度便開始下降，另外，黃桿菌的相對豐