水稻抗病相關(guān)RNA解旋酶基因OsBIRH1的功能分析及YTH蛋白基因家族的初步研究.pdf

1、浙江大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院博士學(xué)位論文水稻抗病相關(guān)RNA解旋酶基因OsBIRH1的功能分析及YTH蛋白基因家族的初步研究姓名：李大勇申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：宋鳳鳴20071001OsBIRHl基因T1代擬南芥植株。Southern分析表明l～2個拷貝的OsBIRHl基因已整合到擬南芥基因組DNA中。RTPCR分析結(jié)果表明所檢測的OsBIRHI轉(zhuǎn)基因煙草T3代單拷貝純合體植株都能夠正常表達(dá)?？共⌒詼y定表明，這些轉(zhuǎn)基因植

2、株提高了對Alternaria6r甜s七耙。腸、PseudorYlonassyringaepvfomdf0DC3000的抗病性，這些轉(zhuǎn)基因揎株中尸尺一』，P兄2、PR一5PD幾，2基因都有組成型增強(qiáng)表達(dá)。此外，轉(zhuǎn)OsBIRHl基因植株對干旱脅迫和氧化脅迫都表現(xiàn)出一定的抗性。這些結(jié)果表明OsBIRHl編碼了一個DEAD—boxRNA解旋酶，而且在植物抗病和抗逆方面扮演著重要的角色。最近，運用生物信息學(xué)方法在蛋白數(shù)據(jù)庫中鑒定發(fā)現(xiàn)一類非常保守

3、的未知功能蛋白，并且推測這些包含保守結(jié)構(gòu)域YTH的蛋白可能具有RNA結(jié)合的攝性。為了深入了鱷這些含YTH結(jié)構(gòu)域蛋自的生物學(xué)功能，我們運用生物信息學(xué)方法在擬南芥和水稻基因組中分別鑒定了13和12個基因，命名為AtYTH01—13和OsYTH01～12。這些結(jié)果表明在高等植物中含有YTH結(jié)構(gòu)域的蛋島組成一個相對較小的基因家族。擬南芬和水稻的YTH家族成員蛋白都包含一個非常保守的YTH結(jié)構(gòu)域，但是在這個結(jié)構(gòu)域外還沒有發(fā)現(xiàn)其它已知的或者保守的結(jié)

4、構(gòu)域。將AtYTH05和AtYTH07的編碼區(qū)ORF克隆進(jìn)原核表達(dá)載體，純化獲得重組的蛋自。凝膠阻滯試驗的結(jié)果發(fā)現(xiàn)重組的AtYTH05融合蛋白能夠在體外與單鏈RNA相結(jié)合，表明YTH蛋白具有RNA結(jié)合活性。同時，我們也用RTPCR的方法分析了擬南芥YTH家族所有成員的表達(dá)模式，結(jié)果顯示擬南芥YTH家族基函的表達(dá)都存在著組織和時空韻特異性。我們還克隆了AtYTH05和AtYTH07的啟動子，構(gòu)建Promoter：：GUS融合基因并轉(zhuǎn)化擬南