貴州省豬源大腸桿菌四環(huán)素耐藥基因檢測及轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、目前抗菌藥物的不合理使用導(dǎo)致細(xì)菌的耐藥性問題越來越嚴(yán)重，這大大的增加了抗菌藥物對細(xì)菌性疾病防治的難度。為了解貴州省規(guī)模養(yǎng)殖場豬源大腸桿菌對四環(huán)素類抗生素的耐藥水平和四環(huán)素耐藥基因的分子流行情況，探討細(xì)菌耐藥性獲得及傳播方式，建立大腸桿菌四環(huán)素耐藥基因水平轉(zhuǎn)移模型，了解四環(huán)素耐藥基因在細(xì)菌間的轉(zhuǎn)移頻率和方式；同時(shí)探討解決大腸桿菌耐藥性問題的方法，采用中藥消除耐藥質(zhì)粒降低細(xì)菌耐藥性，為豬大腸桿菌病的防治和抗菌新藥的研究提供幫助。
　　

2、本研究參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)標(biāo)準(zhǔn)，采用微量肉湯稀釋法檢測大腸桿菌分離株對四環(huán)素類抗生素等12種藥物的耐藥情況，并通過PCR擴(kuò)增方法檢測其攜帶7種四環(huán)素耐藥基因情況。結(jié)果表明：160株大腸桿菌對四環(huán)素、金霉素、土霉素、米諾環(huán)素、地美霉素、強(qiáng)力霉素、卡那霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、磺胺嘧啶和頭孢唑林的耐藥率分別為：94.36％、92.96%、100%、18.31%、70.42%、59.15%、66.29%、48.

3、76%、29.82%、21.62%、91.67%、50.00%。大腸桿菌分離株最少對3種藥物耐藥，最多對11種藥物均耐藥，多重耐藥率達(dá)100%。四環(huán)素耐藥基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、tetM和tetO的檢出率分別為60.63%、74.38%、51.88%、11.88%、0、64.38%和0，四環(huán)素耐藥基因的檢出率與其對四環(huán)素的耐藥性呈正相關(guān)。
　　四環(huán)素體外誘導(dǎo)鑒定耐藥基因?qū)Υ竽c桿菌耐藥水平的影響結(jié)果表明

4、，在有藥物壓力下，含tetB基因的大腸桿菌菌株可以從敏感菌快速誘導(dǎo)成高度耐藥菌， tetB基因是影響大腸桿菌對四環(huán)素高度耐藥的重要因素之一。將含tetB基因的耐藥質(zhì)粒向大腸桿菌DH5α進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)成功獲得轉(zhuǎn)化子，說明大腸桿菌中四環(huán)素耐藥質(zhì)?？梢砸赞D(zhuǎn)化的方式向大腸桿菌DH5α進(jìn)行轉(zhuǎn)移tetB基因，且能在受體菌中穩(wěn)定編碼外排泵蛋白表達(dá)出四環(huán)素耐藥性。在tetB接合轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)中，大腸桿菌EC1和EC2向沙門氏菌S1接合轉(zhuǎn)移頻率分別為1.68x10

5、-3和2.24x10-3，而兩株大腸桿菌與金黃色葡萄球菌進(jìn)行接合實(shí)驗(yàn)時(shí)未獲得接合子，表明大腸桿菌可能不能以接合的方式向金黃色葡萄球菌轉(zhuǎn)移四環(huán)素耐藥性。
　　采用中藥消除耐藥質(zhì)粒從而降低質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)1/2MIC（最小抑菌濃度）的黃連、金銀花、艾葉、五倍子作用24h后對大腸桿菌耐藥性的消除率分別為5.34%、2.67%、10.01%、12.53%；作用48h后其消除率分別為7.27%、3.47%、10.93%、13