孕牛外周血中胎兒游離DNA的檢測及其在性別鑒定中的應(yīng)用.pdf

1、　本實(shí)驗(yàn)以奶牛為對象，檢測懷孕一定時(shí)期奶牛母體外周血中是否存在胎兒游離DNA，如果存在，初步確定其出現(xiàn)的最早時(shí)間，嘗試?yán)闷涮匦赃M(jìn)行非創(chuàng)傷性產(chǎn)前性別鑒定的可行性。經(jīng)實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論：1.懷孕一定時(shí)期的奶牛母體外周血中可以檢測到胎兒游離DNA，并可用于非創(chuàng)傷性產(chǎn)前性別鑒定。2.在本實(shí)驗(yàn)中，懷孕母牛最早在三個(gè)月即可在母體外周血中檢測到胎兒游離DNA。3.以血漿中的胎兒DNA為模板要比以血清中的胎兒DNA為模板的性別鑒定率要高。4.以SRY基因不

2、同部位設(shè)計(jì)巢式PCR引物對性別檢出率無影響，但是在HMG-box內(nèi)設(shè)計(jì)的引物也可用于擴(kuò)增別的動物SRY基因。5.以不同的方法提取母體血漿/血清中的胎兒DNA，其性別鑒定靈敏度依次為：微量DNA提取試劑盒提取DNA＞加熱法提取DNA＞苯酚/氯仿法提取DNA＞直接以血漿/血清作模板。6.隨著孕周的增加，懷孕母體外周血中胎兒游DNA的檢出率增加：懷孕晚期的性別鑒定率＞懷孕中期的性別鑒定率＞懷孕早期性別檢測率。7.巢式PCR檢測靈敏度可以達(dá)到1