水稻EREBP型轉(zhuǎn)錄因子基因OsBIERFs和F-box蛋白基因OsHIHN-n11的克隆鑒定與功能分析.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文水稻EREBP型轉(zhuǎn)錄因子基因OsBIERFs和F-box蛋白基因OsHIHN-n11的克隆鑒定與功能分析姓名：曹亦菲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：鄭重;宋鳳鳴20050501與G C C b o x 順式作用元件D N A 序列相結(jié)合。同時(shí)將O s B I E R F 3 的編碼區(qū)O R F 與綠色熒光蛋白基因構(gòu)建成融合載體進(jìn)行O s B I E R F 3 蛋白的亞細(xì)胞定位，發(fā)現(xiàn)其存在于細(xì)胞核內(nèi)。研究

2、了O s B I E R F s 基因在B T H 誘導(dǎo)水稻抗病性以及水稻一稻瘟菌( M a g n a p o r t h eg ? i s e c l ) 親和與不親和互作中的表達(dá)模式。B T H 能快速誘導(dǎo)O s B I E R F I 、O s B I E R F 3和O s B I E R F 4 三個(gè)基因的表達(dá)，在水處理的對(duì)照中，O s B I E R F l 在實(shí)驗(yàn)期內(nèi)只有相對(duì)恒定的基礎(chǔ)表達(dá)，O s B I E R F 3

3、 和O s B I E R F 4 則沒(méi)有出現(xiàn)任何表達(dá)信號(hào)。在水稻幼苗與稻瘟菌的不親和性互作中，O s B I E R F l 和O s B I E R F 3 能被激活并且維持較高水平的表達(dá)，而在水處理和與M g r i s e a 親和性互作中只檢測(cè)到微弱的本底表達(dá)。另外用S A 處理水稻幼苗1 h 后O s B l E R F l 、O s B I E R F 3 和O s B I E R F 4 都被快速激活表達(dá)，而且在2 4

4、h 后它們的表達(dá)都有所增加。這些結(jié)果都表明，O s B I E R F s 基因的表達(dá)與水稻的抗性反應(yīng)和( 或) 水稻和病原菌的非親和互作有關(guān)。用2 0 0 m m o l ／L 的N a C l處理水稻幼苗1 h 后快速誘導(dǎo)O s B I E R F l 、O s B I E R F 3 和O s B I E R F 4 基因的表達(dá)，其表達(dá)水平比對(duì)照略高。冷害處理能快速激活O s B l E R F 3 的表達(dá)并且在2 4 h 仍維持

5、在一個(gè)較高的水平，盡管冷害處理也能誘導(dǎo)O s B I E R F I 和O s B I E R F 4 的表達(dá)，但顯著表達(dá)只在處理后2 4 h 才檢測(cè)到。干旱處理也能誘導(dǎo)O s B I E R F 基因的表達(dá)，但表達(dá)水平除了O s B l E R F 3 外另兩個(gè)基因表達(dá)似乎都有降低。這些結(jié)論都表明O s B I E R F 基因在逆境信號(hào)傳遞中的普遍作用。將O s B I E R F 3 基因連接到轉(zhuǎn)基因載體C H F 3 的C a

6、M V 3 5 S 下游，通過(guò)根癌農(nóng)桿菌( A g r o b a c t e r i u mt u m e f a c i e n s ) 介導(dǎo)的葉盤法轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化煙草，K a n + 抗性和P C R篩選獲得1 1 株轉(zhuǎn)O s B I E R F 3 基因T O 代煙草植株。S o u t h e r n 分析表明O s B I E R F 3 基因已整合到煙草基因組D N A 中。N o r t h e r n 分析結(jié)果表明所檢測(cè)的

7、O s B I E R F 3 轉(zhuǎn)基因煙草T 0 代植株大部分能夠正常表達(dá)O s B I E R F 3 基因。過(guò)量表達(dá)O s B l E R F 3 基因的轉(zhuǎn)基因植株中防衛(wèi)反應(yīng)相關(guān)基因P R ．婦表達(dá)增強(qiáng)?？共⌒詼y(cè)定表明，O s B I E R F 3 轉(zhuǎn)基因T 1 代植株對(duì)番茄花葉病毒( T o M V ) 和煙草野火病菌( P s e u d o m o n a s s y r i n g a P p vt a b a c i )