15204.雙鏈rna結(jié)合蛋白pactrax在神經(jīng)元遷移中的功能研究

1、密級：中國科學(xué)院大學(xué)UniversityofChineseAcademyofSciences博士學(xué)位論文研究所：2013年3月摘要雙鏈RNA結(jié)合蛋白PACT／RAX在神經(jīng)元遷移中的功能研究摘要人類的PACT及其鼠科同源蛋白RAX是35KD的雙鏈RNA結(jié)合蛋白，最早作為PKR(IFN誘導(dǎo)的dsRNA依賴的蛋白激酶)的激活蛋白分別被發(fā)現(xiàn)。它可以在多種應(yīng)激刺激下發(fā)生磷酸化，包括砷毒性刺激、血清饑餓、毒性細(xì)胞因子刺激、毒胡蘿b素以及雙氧水處理、

2、酒精刺激、維生素Bl缺乏等。磷酸化的PACT可以和PKR相互作用，破壞PKR自身的分子內(nèi)相互作用，改變PKR的構(gòu)象使其白磷酸化激活，從而磷酸化下游底物eIF20【，抑制蛋白翻譯，引起細(xì)胞生長抑制或者凋亡。后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)，PACT在小RNA介導(dǎo)的基因沉默過程中也扮演重要角色，它通過和TRBP、Dicer、以及A902的作用，參與siRNA及miRNA的加工成熟以及之后的RNAi基因打靶過程。利用同源重組技術(shù)破壞RAX基因的正常表達(dá)會引起小鼠

3、嚴(yán)重的小耳畸形，顱面缺陷，體型減小及生育障礙，這與該小鼠出生后垂體前葉發(fā)育不全有關(guān)。dRax(PACT在果蠅中的同源基因)完全敲除的果蠅神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育不良，而RAX基因全長敲除的小鼠無法正常發(fā)育，胚胎著床前便死亡。這些研究都提示了PACT／RAX在胚胎及生后發(fā)育過程中的重要作用。我們的研究發(fā)現(xiàn)RAX在小腦發(fā)育早期表達(dá)量高，并隨發(fā)育進(jìn)程逐漸降低，RAX在新生小鼠的小腦顆粒細(xì)胞前體細(xì)胞中高表達(dá)，成熟后表達(dá)下降。將新生小鼠顆粒細(xì)胞前體中RAX表

4、達(dá)水平下調(diào)后，細(xì)胞遷移速率特異性降低。體外培養(yǎng)的小腦微植體中，RAX下調(diào)的細(xì)胞遷移速率也降低。下調(diào)COS7細(xì)胞中的PACT水平，細(xì)胞的愈傷遷移也受到抑制。并且PACT／RAX的第三個結(jié)構(gòu)域?qū)τ谄潴w內(nèi)體外調(diào)控細(xì)胞遷移是必須的，而PACT／RAx的經(jīng)典下游PKR卻非介導(dǎo)其新功能的關(guān)鍵分子。PACT敲減會引起COS7細(xì)胞的貼壁和粘附異常，其細(xì)胞骨架及黏著斑的分布及形態(tài)都發(fā)生改變，這一定程度上可以解釋為何PACT敲減影響了細(xì)胞遷移。本論文發(fā)現(xiàn)了