16002.精氨酸親和色譜分離純化超螺旋質(zhì)粒dna

1、精氨酸親和色譜分離純化超螺旋質(zhì)粒精氨酸親和色譜分離純化超螺旋質(zhì)粒DNAPurificationofsupercoiledplasDNAbyarginineaffinitychromatography學(xué)科專業(yè)：生物化工研究生：白金山指導(dǎo)教師：白姝副教授天津大學(xué)化工學(xué)院二零一三年六月摘要與病毒載體相比，質(zhì)粒DNA具有安全性好、毒性和免疫原性較低以及易于生產(chǎn)等諸多優(yōu)勢，在臨床上已被廣泛用于基因治療和DNA疫苗。氨基酸親和色譜是利用小分子氨基酸

2、作為親和配基，基于氨基酸和超螺旋質(zhì)粒DNA之間的特異性相互作用進(jìn)行質(zhì)粒純化的色譜方法，具有操作簡便、成本低廉等優(yōu)勢。有研究表明，精氨酸親和色譜對超螺旋質(zhì)粒DNA具有很好的選擇性，且色譜純化的條件溫和、操作簡便。本研究以精氨酸作為親和配基，考察了介質(zhì)性能（間隔臂長度，配基密度）和操作條件對質(zhì)粒DNA吸附量和純化效果的影響。首先，以瓊脂糖凝膠SepharoseCL6B作為基質(zhì)，利用環(huán)氧氯丙烷和14丁二醇二縮水甘油醚進(jìn)行活化，得到不同間隔臂長

3、度和活化密度的環(huán)氧基團(tuán)，并進(jìn)行精氨酸配基的固定化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同間隔臂長度的精氨酸親和介質(zhì)中配基密度分別為21.8mmolLgel（3carbon）和21.2mmolLgel（10carbon）。同時(shí)，以14丁二醇二縮水甘油醚作為間隔臂活化介質(zhì)得到配基密度分別為9.6、28.5和47.4mmolLgel的精氨酸親和介質(zhì)。然后，采用迎頭分析的方法，考察不同間隔臂長度和配基密度對質(zhì)粒DNA動態(tài)吸附容量的影響。研究發(fā)現(xiàn)，配基和載體之間的間

4、隔臂越長質(zhì)粒DNA的動態(tài)吸附容量越大，質(zhì)粒DNA的動態(tài)吸附容量隨配基密度升高而增大，在配基密度為47.4mmolLgel時(shí)，質(zhì)粒DNA的吸附容量最大為6.32mgmLgel。最后，利用精氨酸親和色譜從E.coli細(xì)胞裂解液中直接分離純化超螺旋質(zhì)粒DNA，優(yōu)化了質(zhì)粒DNA吸附和洗脫的條件，并詳細(xì)討論了上樣量和配基密度對質(zhì)粒DNA純化效果的影響。結(jié)果表明，所得質(zhì)粒樣品的純度和收率隨上樣量的增加而降低，質(zhì)粒的收率隨配基密度的增加而增大。利用R