SARS相關(guān)冠狀病毒PPA-ELISA和nest-PCR檢測(cè)方法的建立及聯(lián)合應(yīng)用.pdf_第1頁
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1、重癥急性呼吸綜合癥(Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS)的病原是SARS冠狀病毒(SARS.CoV),為了調(diào)查野生動(dòng)物和家畜家禽體內(nèi)攜帶的冠狀病毒的情況以及其與SARS.CoV的基因序列同源性,本研究根據(jù)SPA能與多種動(dòng)物血清IgG結(jié)合的特性,建立了間接PPA-ELISA檢測(cè)多種動(dòng)物血清中SARS病毒相關(guān)抗體的方法;根據(jù)SARS冠狀病毒聚合酶基因序列設(shè)計(jì)引物,建立套式PCR(nest-PCR)檢

2、測(cè)方法.對(duì)11種動(dòng)物146個(gè)樣品進(jìn)行RT-PCR檢測(cè),并用PCR產(chǎn)物測(cè)序.與Genbank中的SARS相關(guān)冠狀病毒的聚合酶基因進(jìn)行序列比較,構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,分析不同宿主來源動(dòng)物冠狀病毒與SARS冠狀病毒的同源性.兩種檢測(cè)方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:SPA與多種哺乳動(dòng)物血清中的IgG有較好的結(jié)合能力,本實(shí)驗(yàn)確定了PPA-ELISA的抗原-抗體最佳反應(yīng)時(shí)間,HRP-SPA與抗體反應(yīng)最佳時(shí)間及底物溶液的顯色時(shí)間,在此基礎(chǔ)上,建立了間接PPA-ELIS

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