水牛卵母細(xì)胞顯微受精研究.pdf

1、 該研究主要探討水牛胞質(zhì)內(nèi)受精后精子的形態(tài)變化、原核形成類型及相關(guān)影響因素.結(jié)果發(fā)現(xiàn),ICSI后13h,59.4％的精子頭部已膨大,且有18.8%的精子進(jìn)入解聚狀態(tài).雌雄原核發(fā)育不同步,雄原核在ICSI后16h和19h的形成率分別為3.2%和40.0%,雌原核在ICSI后13h已達(dá)到71.9%,16h時提高到88.7%.ICSI卵經(jīng)離子霉素與6-DMAP聯(lián)合激活后19h的激活率達(dá)91.3%,且胚胎的核型大部分為2PN+PB.水牛ICSI

2、卵子用Ionomycin+6-DMAP聯(lián)合激活較Ionomycin單激活效果好,前者的雄原核形成率顯著高于后者(33.3%vs 20.6%,p<0.05).用5mmol/L的DTT預(yù)處理精子1 h,可提高精子的解聚率(64.2%vs 45.5%,p<0.05),但對雄原核的形成率無顯著影響(33.3%vs32.7%,p>0.05).死精子ICSI后經(jīng)Ionomycin+6-DMAP聯(lián)合激活獲得了同活精子相同的受精與胚胎發(fā)育效果,二者之間

3、雄原核形成率(29.8%vs 33.3%)、胚胎分裂率(86.9%vs 85.6%)、囊胚率(30.3%vs 29.6%)、囊胚孵化率(41.3%vs 43.2%)均無顯著性差異(p>0.05).顯微注射前水牛精子用1.0mmol/L GSH進(jìn)行預(yù)處理有助于提高ICSI后胚胎分裂率(92.6%vs 85.5%,p<0.05),用0.25mmol/L GSH進(jìn)行預(yù)處理有助于提高ICSI后胚胎囊胚發(fā)育率(44.9%vs 28.0%,p<0.

4、01).將處理水牛精子的肝素濃度從50μg/mL提高到600μg/mL對其ICSI后胚胎的分裂率(90.9%vs 85.7%,p>0.05),囊胚率(27.1%vs31.4%,p>0.05),囊胚孵化率(40.6%vs 45.5%,p>0.05)均無顯著影響.以上結(jié)果表明:(1)水牛精子胞質(zhì)內(nèi)顯微受精的雌、雄原核發(fā)育不同步,雌原核比雄原核早3h形成;(2)水牛卵母細(xì)胞ICSI和激活后用1.9mmol/L 6-DMAP培養(yǎng)處理3h能提高其