12063.持久饑餓對日本三角渦蟲細胞形態(tài)結構、生化代謝和基因表達的影響

1、EFFECTSoFPROLoNGEDSTARVALTIONONTHECYTOMORPHOLOGY；METABLICCHANGEANDGENESEXPRESSIONINPLANARIANSD【廠G￡強己4J■PD、71：2IC么ADissertationSubmittedtot11eGraduateSchoolofHenanNormalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsforth

2、eDegreeofDoctorofPhilosophyinScienceByMaKexueSupervisor：ProfChenGuangwenApr20143差異RTPCR和差異蛋白質組學技術篩選饑餓誘導日本三角渦蟲上調表達的基因和蛋白質克隆和測序了一些受饑餓誘導上調表達的cDNA片段，發(fā)現了一些有價值的EST序列，這些EST序列涉及細胞代謝、細胞死亡、細胞應激、蛋白質水解酶、RNA結合蛋白、轉錄因子和細胞骨架類蛋白。實時熒光定量PC

3、R結果表明：DjHSP70、DjHSP90、DjHSP40和DjCl93A基因上調表達，而OjGeaZ8基因轉錄水平沒有明顯變化。利用2D電泳技術分離正常和饑餓渦蟲組織差異表達的蛋白質質點，在饑餓渦蟲組織中分離出2000個質點，差異質點超過1000個。質譜分析和NCBI數據庫檢索結果提示：部分上調表達的質點分別歸屬于細胞應激類、干細胞相關類、蛋白激酶類、膜泡運輸類、抗氧化性蛋白類、受體類、轉錄因子類、細胞代謝類、表觀遺傳修飾類、細胞死亡

4、相關蛋白類和RNA結合蛋白類。其中，表達水平超過2倍的蛋白質分別是HSP70／90、Piwi1蛋白、Vasa相關蛋白、Nanos相關蛋白、非受體絲／蘇氨酸激酶、非受體酪氨酸激酶和受體酪氨酸激酶、突觸相關蛋白、肌球蛋白重鏈、抗氧化酶6、細胞色素P450、SOD、G蛋白偶聯的受體激酶、HMG蛋白、氨肽酶、U62家族肽酶蛋白、絲氨酸蛋白水解酶、磷酸丙糖異構酶、磷酸甘油酸激酶、Caspase7、ATGl1和ATG4B。該工作為進一步研究上調表達

5、基因和蛋白質的功能奠定了良好的基礎。4。持久饑餓誘導日本三角渦蟲氧化和抗氧化性損傷反應持久饑餓對脂質過氧化的影響采用丙二醛(MDA)水平進行評估。結果表明，渦蟲饑餓30天后，MDA水平升高17倍，饑餓60天升高2倍，饑餓90天升高4倍。饑餓30天后抗氧化酶SOD活性升高50％，饑餓60天升高76％，饑餓90天升高123％。饑餓30天后CAT活性升高10％，饑餓6090天后升高20％。結果表明：持久饑餓導致氧化性損傷，抗氧化酶SOD和CA

6、T活性提高能保護細胞免受損傷。5日本三角渦蟲DjHSP90、DjGea78和DjHSP40基因克隆及生物信息學分析DjHSP90cDNA全長2354bp，包含2148bp的開放閱讀框(ORF)，編碼715個氨基酸，氨基酸序列上含有HSP90蛋白家族的5個標簽序列。ORF區(qū)DNA測序表明，DjHSP90基因結構區(qū)僅含有1個48bp內含子。HSP90系統發(fā)生樹的基部是單細胞酵母，依次是植物、腔腸動物、扁形動物、軟體動物、節(jié)肢動物和脊椎動物。