15112.肝素酶的表達純化及性質(zhì)研究

1、分類號：UDC：密級：華東理工大學學位論文肝素酶的表達純化及性質(zhì)研究范氏壁(PHAMTHIBICH)指導教師姓名：趙健教授華東理工大學生物工程學院申請學位級別：碩士專業(yè)名稱：生物化工論文定稿日期：20121215論文答辯日期：20130111學位授予單位：華東理工大學學位授予日期：2e留年3其19日答辯委員會主席：評閱人：聲彬杉也互強l土同≈華東理工大學碩士學位論文第1頁肝素酶的表達純化及性質(zhì)研究摘要“肝素酶是一類多糖裂解酶，來源于肝素

2、黃桿菌的三種肝素酶裂解肝素在低分子肝素的制備以及肝素類分子結(jié)構(gòu)解析等領域具有十分重要的應用前景。本研究將重組質(zhì)粒pGEXHepI轉(zhuǎn)化到BL2l(DE3)后，在大腸桿菌中進行低溫誘導表達，約90％的融合蛋白以可溶性形式表達。粗酶液經(jīng)過GSTtag一步親和純化優(yōu)化工藝獲得的重組肝素酶I(HepI)比活達7035IU／mg，酶活回收率為822％。純化的酶最適溫度350C，最適pH值7O，在NaCl200rnM、Cacl21nll訂活性最高。G

3、STHepI對溫度很敏感，溫度高于400C大部分酶都失活；在40C放置16h后，酶活損失達70％左右，說明該酶穩(wěn)定性較差。實驗發(fā)現(xiàn)NaCl和CaCl2對酶有很強的激活和保護作用，在測活緩沖液中添加1InMCaCl2和200mMNaCl能提高酶活性15倍。進一步將純化的酶對肝素裂解進行了SAX—HPLC分析，實驗圖譜表明重組GSTH印I裂解肝素的產(chǎn)物和野生型黃桿菌來源的肝素酶裂解產(chǎn)物圖譜基本一致，說明GST標簽對酶的底物特異性沒有影響。此