18811.熒光探針的設(shè)計合成及其在蛋白質(zhì)雙亞磺?；瘷z測中的應(yīng)用研究

1、分類號：密級：UDC：學(xué)號：405503712079南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文熒光探針的設(shè)計合成及熒光探針的設(shè)計合成及其在其在蛋白蛋白質(zhì)雙亞磺?；p亞磺?；瘷z測中的應(yīng)用研究檢測中的應(yīng)用研究TheSynthesisofFluescentProbeApplicationfProteinsDisulfenylationDetection劉庭香培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)化學(xué)學(xué)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：梁汝萍教授申請學(xué)位的學(xué)科門類：理學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱

2、：分析化學(xué)論文答辯日期：2015年5月30日答辯委員會主席：評閱人：2015年月日摘要I摘要熒光分子探針由于靈敏度高、選擇性好、響應(yīng)快速，能實現(xiàn)原位分析、細(xì)胞毒性小以及生物相容性好等優(yōu)勢在生命分析領(lǐng)域起著重要作用，并已廣泛應(yīng)用于活細(xì)胞的分析檢測。近年來，熒光探針在對目標(biāo)核酸及蛋白方面的檢測獲得了較大的研究進(jìn)展，其中信號增強(qiáng)型的熒光探針更受到研究者的青睞，因為這類探針的背景干擾小，在檢測分析和生物成像應(yīng)用方面具有高靈敏度和特異性。目前，能

3、與目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合的增強(qiáng)型熒光探針很少，且設(shè)計和合成方法的缺乏使得該領(lǐng)域的進(jìn)一步發(fā)展受到阻礙。因此，設(shè)計新型增強(qiáng)型熒光探針，用于對相關(guān)蛋白的高靈敏和特異性識別檢測，具有重要意義。本論文在設(shè)計合成增強(qiáng)型熒光探針及其生物應(yīng)用方面開展了相關(guān)研究，論文主要內(nèi)容如下：1、本章首先對蛋白質(zhì)的定義、結(jié)構(gòu)與功能進(jìn)行了簡介，硫氧還蛋白是蛋白的一種，進(jìn)而對硫氧還蛋白的結(jié)構(gòu)與氧化還原機(jī)制進(jìn)行了闡述。其次，綜述了熒光探針的設(shè)計原理及相應(yīng)機(jī)理，熒光探針的形成與

4、其特有的優(yōu)勢。芘的激發(fā)單線態(tài)壽命較長，易形成激基締合物，因此，本章還綜述了以芘為基礎(chǔ)的熒光探針分子在生物分析中的應(yīng)用。2、熒光探針TAR的設(shè)計合成及表征。合成了能特異性結(jié)合硫氧還蛋白的熒光探針小分子24二甲酮1丙基芘（TAR），采用氫譜、碳譜、高分辨質(zhì)譜等對制備的熒光探針進(jìn)行了表征。采用熒光光譜法和甲基噻唑（MTT）法對TAR的性能進(jìn)行了測試，結(jié)果表明，TAR在強(qiáng)氧化和強(qiáng)還原試劑中均能夠穩(wěn)定存在，具有良好的抗氧化和抗還原能力；此外，在細(xì)

5、胞存活率測試實驗中，當(dāng)TAR濃度增大為100μM時，細(xì)胞的存活率仍能保持85%，表明TAR有良好的生物兼容性，能進(jìn)入細(xì)胞且對細(xì)胞的毒性較小。3、基于TAR熒光探針的蛋白質(zhì)雙亞磺?；瘷z測及細(xì)胞成像應(yīng)用。芘作為一種新型的信號增強(qiáng)型熒光探針可應(yīng)用于具有鄰位巰基蛋白質(zhì)傳感器的構(gòu)建。當(dāng)具有鄰位雙巰基的蛋白被雙氧水氧化后，形成具有鄰位雙次磺酸的蛋白，TAR中二甲酮基團(tuán)間的碳活性位點能特異性結(jié)合次磺酸而將TAR連接到具有鄰位雙次磺酸的蛋白質(zhì)上，兩個次