紋腹叉鼻鲀（Arothron hispidus Linnaeus）淋巴囊腫病的研究.pdf

1、運(yùn)用石蠟包埋切片法、組織化學(xué)方法和電子顯微鏡技術(shù),對(duì)紋腹叉鼻鲀的鰭上的囊腫物的組織病理結(jié)構(gòu)和組織化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究.結(jié)果顯示,其囊腫物是由膨大的細(xì)胞聚集而成,細(xì)胞大小380-400μm,細(xì)胞核變得不規(guī)則,核內(nèi)染色質(zhì)邊集,細(xì)胞質(zhì)邊緣有點(diǎn)狀或塊狀的嗜堿性、呈Feulgen和Mann氏反應(yīng)陽(yáng)性的包涵體,高電子密度的包涵體周?chē)辛切蔚牟《玖Ｗ?直徑約200nm,是典型的虹彩病毒.細(xì)胞膜外有一厚層均質(zhì)的、呈PAS反應(yīng)陽(yáng)性的包膜,這些病理組織特征

2、都是魚(yú)類(lèi)淋巴囊腫病的典型特征.6月份時(shí)囊腫物已變得很小,電鏡下未看到病毒粒子,結(jié)締組織內(nèi)觀察到細(xì)胞的崩解和碎片,此時(shí)病魚(yú)正處于病愈恢復(fù)期.根據(jù)牙鲆淋巴囊腫病毒的主要核衣殼蛋白序列,建立了巢式PCR技術(shù)來(lái)檢測(cè)該病毒,其中外側(cè)引物P1和P2的擴(kuò)增產(chǎn)物大小為348bp,內(nèi)側(cè)引物P3和P4的擴(kuò)增產(chǎn)物的大小為172bp.敏感性實(shí)驗(yàn)表明,巢式PCR要比常規(guī)PCR靈敏10<'7>倍.運(yùn)用巢式PCR技術(shù),檢測(cè)了4月份和6月份的患病紋腹叉鼻鲀的囊腫物,結(jié)

3、果表明4月份的樣品有淋巴囊腫病毒,而6月份的樣品則沒(méi)有,與電鏡觀察結(jié)果一致.用該實(shí)驗(yàn)室研制的鼠抗牙鲆淋巴囊腫病毒的單克隆抗體作為一抗,對(duì)紋腹叉鼻鲀的囊腫物的冰凍切片進(jìn)行間接免疫熒光抗體染色,結(jié)果在熒光顯微鏡下觀察到囊腫細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)發(fā)出綠色熒光,而囊腫細(xì)胞的細(xì)胞核及周?chē)慕Y(jié)締組織無(wú)綠色熒光.對(duì)囊腫物冰凍切片進(jìn)行免疫金-銀染色,結(jié)果顯示囊腫細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)呈陽(yáng)性黑色,而結(jié)締組織為陰性.這些結(jié)果都表明在囊腫細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有淋巴囊腫病毒粒子存在.對(duì)