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1、分類號(hào)Q816學(xué)校代碼10129UDC577學(xué)號(hào)08210024Bacillus.sp.bs1的內(nèi)切葡聚糖酶在大腸桿菌中的表達(dá)研究StudyonExpressionofEndoglucanaseofBacillus.sp.bs1inE.coli申請(qǐng)人:秦偉學(xué)科門類:理學(xué)學(xué)科專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向:蛋白質(zhì)化學(xué)指導(dǎo)教師:寶力德副教授論文提交日期:二〇一一年五月StudyonexpressionofendoglucanaseofB
2、acillus.sp.bs1inE.coliAbstractCelluloseisthemostabundantnaturalganicmaterialinthewld.Itisacheaprenewablenaturalresourceitsutilizationhasasignificantmeaning.Degradationofcellulosebycellulaseisaneffectiveenvironmentfreindl
3、ywayfitsutilizationcellulasehaswideapplicationrangeTherefeapplicationofcellulasehasbeenbecomingthefocusofthereasarchinthisfield.Atpresentstudyingonendoglucanaseisrelativelyintensiveinthisresearcharea.Thisstudywascarriedo
4、utonthebasisoffmerresearchinwhichaBacillussubtilisstrainwithhighercellulaseactivityhasbeenscreenedseparateditsendoglucanasegenehasbeencloned.ThisstrainhasbeenidentifiedbymolecularidentificationhasbeennamedBacillus.sp.bs1
5、.IndertosolubleoverexpressionendoglucanaseinEcoli.differentprokaryoticexpressionvectshavebeenconstructedinthisstudytheirexpressionefficencyhasbeencomparedtheirexpressionconditionshavebeenoptimized.Thethreedifferentexpres
6、sionvectshavebennnamedpQE30C、pET30aCpET28aC.Theiroptimalexressioncomditionfthesolubleoverexpressionofendoglucanasehasbeeninvestigated.ThesolubleoverexpressionoftheendoglucanaseusingexpressionvectpET30aChasachieveditsbest
7、resultattheconditionof25℃inductionwith1mMofIPTGexpressionf3hours.TheexpressionusingtheexpressionvectpET28aCshowsthebestsolubleoverexpressionattheconditionof25℃inductionwith0.8mMofIPTGexpressionf5hours.Theactivitiesofendo
8、glucanaseexpressedbypET30aCpET28aChavebeendeterminedtheoptimalreactionconditionsoftheenzymehavebeeninvestigated.TheenzymeexpressedbypET30aCshowsthebestactivityof1489Umlinthesubstratebuffer(CMCNaassubstratepH7.0)at50℃f30m
9、inreactiontime.TheendoglucanaseexpressedbypET28aCshowsthebestactivityof683Umlinthesubstratebuffer(CMCNaassubstratepH3.0)at55℃f30min.TheexpressedendoglucanaseswithHisTagexpressedbypET30aCpET28aCwaspurifiedbyNiNTAcolumnthe
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