雞傳染性囊病診斷技術(shù)與免疫防治的研究.pdf

1、在2000年夏季,我們自河北省南部地區(qū)高死亡率的不同雞群分離到5株(YN、WA、XT、SH和HD)雞傳染性囊病(IBD)病原.通過(guò)瓊脂凝膠沉淀試驗(yàn)、血清中和試驗(yàn)、致病性和病理學(xué)檢查以及電鏡觀察的結(jié)果證明,此5株病原均為IBD病毒.將5株病毒接種易感雛雞后發(fā)病癥狀明顯,其中XT和HD的死亡率分別為50﹪和65﹪,是兩株超強(qiáng)毒株(vvIBDV).鑒于完全致弱的疫苗免疫保護(hù)性較差,我們選擇其中毒力最強(qiáng)的XT株和HD株通過(guò)絨毛尿囊膜接種雞胚盲傳

2、12代,再在雞胚成纖維(CEF)細(xì)胞上連傳12代,經(jīng)對(duì)易感雛雞的致病性檢查結(jié)果表明,兩株vvIBDV均不引起雛雞發(fā)病.然后將第12代XT株和HD株CEF細(xì)胞毒進(jìn)行Vero細(xì)胞適應(yīng)性傳代培育18代,結(jié)果表明致弱的XT株和HD株均可在Vero細(xì)胞上生長(zhǎng)并產(chǎn)生細(xì)胞病變(CPE),其病毒滴度XT株為10<'7.2>-10<'8.5>TCID<,50>/0.05ml和HD株為10<'5.6>-10<'8.3>TCID<,50>/0.05ml,并可

3、被抗IBDV特異血清所抑制.用HD株制備的Vero細(xì)胞毒皮下和肌肉進(jìn)行免疫試驗(yàn)、致病性及致瘤性檢查,證明該毒株免疫原性良好、毒力低且不返強(qiáng)、無(wú)致瘤性.該文首次建立了四種診斷雞傳染性囊病的新技術(shù),即磷酸鹽緩沖系統(tǒng)(PBS)代替巴比妥緩沖系統(tǒng)(BBS)進(jìn)行對(duì)流免疫電泳(CIEP)技術(shù)、火箭免疫電泳(RIE)技術(shù)、雞源金黃色葡萄球菌蛋白A直接平板協(xié)同凝集試驗(yàn)(SPA-CAT)和SPA-掃描免疫電鏡(SPA-SIEM)技術(shù).試驗(yàn)結(jié)果表明,與瓊脂

4、凝膠沉淀試驗(yàn)(AGPT)進(jìn)行比較,在檢測(cè)實(shí)驗(yàn)感染雞和疑似IBD病雞的法氏囊組織抗原時(shí),PBS-CIEP和RIE比AGPT敏感,出現(xiàn)結(jié)果早,而SPA-CAT與AGPT相當(dāng).因此,SPA-CAT、PBS-CIEP和RIE是早期診斷IBD的簡(jiǎn)單、廉價(jià)、快速、特異且重復(fù)性好的新診斷方法.SPA-SIEM檢測(cè)組織中的IBDV時(shí),結(jié)果直觀并易于判定病毒的大小和形態(tài).此外,該文對(duì)IBD油乳劑組織滅活苗及其與新城疫-腎型和腺胃型傳染性支氣管炎三聯(lián)油乳劑