29345.粘質(zhì)沙雷氏菌脂肪酶在原核和真核系統(tǒng)中的克隆、表達及定性_第1頁
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1、華東理工大學碩士學位論文粘質(zhì)沙雷氏菌脂肪酶在原核和真核系統(tǒng)中的克隆、表達及定性姓名：葉發(fā)香申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：范立強20091229第1I頁華東理工大學碩士學位論文SerratiamarcescensECUl010Lipase(1ipA)：Cloning，ExpressionandCharacterizationinProkaryoticandEukaryoticExpressionSystemAbst

2、ractSerratiamarcescensECU1010extracellularlipaseiSallimportantcatalystthatwidelyusedtocatalyzevariouschemicalreactionssuchasnonspecific，stereospecifichydrolysisandesterificationforindustrialbiocatalyticapplicationpurpose

3、Itsabliltyofe伍cientenantioselectivehydrolysisoftrans3(4methoxyphenyl)glycidicacidmethylester【()MPGM]，akeyintermediateinthesynthesisofvasodilatationdrugDiltiazem，hasattracteditsfurtherexploitationSerratiamarcescensECU1010

4、extracellularlipasehasbeenclonedandexpressedEscherichiacolimainlyasinactiveinclusionbodiesToincreaseitssolubleexpression，inthisstudyoptimizationWascarriedoutinbothprokaryoticandeucaryoticlevelsInprokaryotic1evelthreereco

5、mbinantexpressionvectorspET22blipase，pET40b—lipaseandPTⅣlNl—lipasewereconstructedHigherlipaseactivitypET22b—lipaseWaschoosenforfurtheroptimizationTheoptimalsolubleexpressionconditionWasinducedby01mMIPTGand10mMCaCl2inTBme

6、diumat15“Cfor24hoursAfteroptimizationlipaseacitivityWasincreasedfrom06U／mlto2U／mlculturemediumIneukaryoficlevelrecombinantexpressionvectorpPIC9KlipaseWasconstructedAfterelectroporationandactivityscreening，optimizationwas

7、carriedoutinshakeflasksByadjustingthepHbetween60and70，decreasingthetemperaturefrom37℃to23℃，recombinantlipaseactivityinculturemediaWasincreasedby2to3foldreaching4U／m1Recombinantlipasewaspurifiedbyultrafiltrationandanionex

8、changechromatographyItspropertieswerestudiedItsoptimalpHandtemperaturewere85and40℃respectivelyItWasrelativelystablebetweenpH60and10below50℃Thisrecombinantlipasewastoleranttodetergents10werconcentrationofdetergentsandCupi

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