30570.信號芋螺m超家族和a超家族毒素的結(jié)構(gòu)功能研究

1、中山大學碩士學位論文信號芋螺M超家族和A超家族毒素的結(jié)構(gòu)功能研究姓名：曾夏蕓申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：徐安龍20090609中山大學碩士論文信號芋螺M超家族和A超家族毒素的結(jié)構(gòu)功能研究通過對lt3a和lt3b對應的天然粗毒進行TOF／TOF質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)，粗毒tt3a具有～個明顯的羥脯氨酸(Hyp)而粗毒lt3b沒有脯氨酸羥化的修飾。通過合成Hyp取代的It3a進行了氧化折疊和熱穩(wěn)定性研究，發(fā)現(xiàn)具有羥脯氨酸的I

2、t3a能夠提高氧化折疊速率，而對熱穩(wěn)定性Hyp沒有像在膠原蛋白里相似的貢獻。這可能是因為lt3a中沒有像膠原蛋白那樣有足夠多的羥脯氨酸以及螺旋結(jié)構(gòu)，從而不能通過結(jié)合水分子形成穩(wěn)定的“水橋”結(jié)構(gòu)以增強結(jié)構(gòu)的熱穩(wěn)定性。而且羥脯氨酸也沒有表現(xiàn)出對lt3a生物活性的影響。對新發(fā)現(xiàn)的A超家族芋螺毒素ltle，采用pTRX表達系統(tǒng)將ltle與硫氧還蛋白進行基因融合，轉(zhuǎn)入大腸桿菌表達后，通過超聲破碎、親和層析、酶切和凝膠過濾層析等方法，最終得到目的蛋

3、白。組織水平的青蛙坐骨神經(jīng)。腓腸肌模型顯示，重組表達的ltlc在6pM濃度30分鐘內(nèi)完全抑制肌肉的收縮，具有較強的活性，且作用可逆。而且ltlc能夠抑制熱板法中小鼠的舔足反應，提示我們這種A超家族芋螺毒素可能具有一定的鎮(zhèn)痛活性。綜上所述，本文建立了兩種M超家族毒素的化學合成及體外氧化方法，初步研究了它們的生物學和生理學活性；運用TOF／TOF質(zhì)譜確認了粗毒lt3a中羥脯氨酸的存在，并對這種芋螺毒素常見的翻譯后修飾進行了初步的研究，為后續(xù)