泛素化調(diào)控Ras超家族GTP酶水平與活性的研究.pdf

1、Ras超家族GTP酶作為分子開關(guān)，在細(xì)胞內(nèi)眾多的生理生化調(diào)節(jié)過程中起著關(guān)鍵作用，包括基因表達(dá)、細(xì)胞的生長和分化、細(xì)胞周期、細(xì)胞遷移、膜泡運(yùn)輸、細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)之間的物質(zhì)運(yùn)輸?shù)确矫娴恼{(diào)控。許多Ras超家族成員與人類多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系。Ras超家族有大約150個(gè)成員，其中部分已經(jīng)證實(shí)會(huì)被泛素化修飾，并且這種泛素化修飾對(duì)于調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理生化功能起著重要的作用，我們?cè)谇捌谘芯恐幸舶l(fā)現(xiàn)一些該家族成員可以被泛素化降解。因此，泛素化這一修

2、飾方式作為調(diào)控Ras超家族蛋白水平與活性的一種機(jī)制，在Ras超家族蛋白所參與調(diào)控的各種信號(hào)通路中可能有著非常重要而廣泛的意義。但是目前對(duì)Ras超家族泛素化調(diào)控方面的系統(tǒng)性研究還很少。
　　 本文將人源的Ras超家族成員分別克隆連入帶有Flag標(biāo)簽的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體中，測序鑒定并表達(dá)驗(yàn)證其正確性。至今，已經(jīng)成功克隆出了91個(gè)Ras超家族成員。同時(shí)，系統(tǒng)篩選檢測了C2-WW-HECT家族泛素連接酶成員Smurf1、Smurf2、

3、Wwp2、Nedd4和Itch對(duì)這些Ras超家族成員的蛋白水平的影響，發(fā)現(xiàn)18個(gè)Ras超家族成員的蛋白水平會(huì)被C2-WW-HECT家族泛素連接酶的某些成員所調(diào)控。
　　 此外，通過進(jìn)一步深入研究Smurf1對(duì)RhoB蛋白水平的調(diào)控、蛋白酶體抑制劑對(duì)其降解的抑制作用、Smurf1與RhoB在細(xì)胞內(nèi)和體外條件下的相互作用以及體內(nèi)體外泛素化情況等方面，證實(shí)了Smurfl可以直接與RhoB結(jié)合泛素化調(diào)控RhoB的降解。這這種泛素化調(diào)控在