雙孢蘑菇菌株As2796基因文庫(kù)的構(gòu)建.pdf

1、廈門大學(xué)博士學(xué)位論文雙孢蘑菇菌株As2796基因文庫(kù)的構(gòu)建姓名：白雪申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：蘇文金宋思揚(yáng)2001.6.27眸細(xì)胞、釋放基岡組DNA后，就要避免激烈地轉(zhuǎn)動(dòng)試管，以避免DNA斷裂成人小的片段。根捌n：260nm／290nm波長(zhǎng)處對(duì)DNA的定量分析，JjI‘述力法提取的DNA濃度在128u∥“l(fā)問，o3％瓊脂糖凝膠電泳分折表明，提取的DNAH段約任4550kb問。因此，可用f構(gòu)建基叢l文J車。莊與合適的載體連

2、接前，提取的基閑組DNA片段還要經(jīng)限制‘盹內(nèi)i』J酶Sau3AI部分消化以降解為合適的H段，并用Sonthern描述的力i』、川瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)iJ分析。DNA消t川矍I叮根拱，：其大4Itj瓊脂柵凝膠電泳眠純1t，也I，J^j酶解后直接純化，阿用J』司載體的近jK，，‘吹翰證H月，艤孢蘑菇菌株As2796的總DNA提取物用限制性內(nèi)切酶％au3AI部分消化20min。然后直接進(jìn)行純化(即1i經(jīng)瓊脂糖凝膠電脈剛收J(rèn)I段)所獲得的片段與載體

3、EMBL3的連接效果最好。在經(jīng)限制性內(nèi)切酶Sml3AI消化和純化后，用0g一1％的瓊脂糖凝膠電泳對(duì)酶消化物進(jìn)行分析表[叭’j分子量標(biāo)準(zhǔn)(KDNA經(jīng)FcI和Hindlll雙酶切)比較，取孢媾辨，總DNA的消化片段、勻人小為14kb。然后jlj商業(yè)制備的EMBL3(灝找體】IJ接受的插入片段為923kb，Promega公司產(chǎn)品)進(jìn)行連接，即把T。DNA連接酶和雙孢蘑菇總DNA酶消化物和EMBL3在12℃共同保溫過僅，然后進(jìn)行包裝(即把f。述