利用PCR-SSCP檢測ZEN對大鼠睪丸中p53基因第八外顯子突變的研究.pdf

1、玉米赤霉烯酮(zearlenone)又稱為F-2雌性發(fā)情毒素,是由玉米赤霉菌、禾谷鐮刀菌,三線鐮刀菌等產(chǎn)生的具有雌激素作用的真菌毒素,主要污染小麥、大麥、燕麥、玉米等農(nóng)作物及動物飼料.玉米赤霉烯酮能引起母畜子宮肥大和陰道上皮角質(zhì)化,公豬接觸玉米赤霉烯酮后出現(xiàn)"雌性化"癥狀,給廣大養(yǎng)殖戶、豬場造成很大的影響.因而探討飼料中玉米赤霉烯酮對生殖細(xì)胞基因變異及蛋白表達(dá)對繁殖帶來的影響,如何減小飼料中霉菌毒素對動物繁殖和生長性能的影響有十分重要意

2、義.本研究通過對各組大鼠灌服不同劑量的玉米赤霉烯酮,攻毒24h以后,進(jìn)行了大鼠睪丸DNA的提取.提取的DNA通過0.8％瓊脂糖凝膠電泳的定性鑒定和核酸檢測儀的定量鑒定,結(jié)果表明:所提取的DNA純度較高,含量在170ug/ml左右,適合于做PCR的模板.針對p53基因第八外顯子進(jìn)行了PCR反應(yīng),反應(yīng)產(chǎn)物通過0.8％瓊脂糖凝膠電泳的定性純度鑒定,對照DNA分子標(biāo)準(zhǔn)物,結(jié)果表明:所得到的PCR產(chǎn)物的分子量大小為200bp左右,表明產(chǎn)物均一,與

3、預(yù)測所得產(chǎn)物198bp十分接近,說明所得產(chǎn)物即為大鼠p53基因的第八外顯子片段.本實驗用所得PCR產(chǎn)物通過非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行了SSCP分析,表明不同劑量的玉米赤霉烯酮都對大鼠p53基因的第八外顯子的構(gòu)象產(chǎn)生了影響,而且可能對p53基因的堿基序列產(chǎn)生了作用,引起了該外顯子的基因突變.實驗的最后我們對PCR產(chǎn)物回收后進(jìn)行基因測序,通過對所得到的p53基因第八外顯子序列進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)其確實發(fā)生了基因的突變.突變主要發(fā)生在基因的5'端